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培养细胞的染色实验——吖啶橙染色荧光观察法

2019.4.04
实验方法原理吖啶橙(Acridine Oringe:AO)是一种常用荧光染料,用于直接染色观察活细胞或固定染色观察细胞均可。吖啶橙对DNA和RNA都能染色,快速、简便和有一定的特异性。吖啶橙对活细胞毒性小,配成2×10-4~1×10-4 可用于直接染色观察法更好。
实验材料

细胞

试剂、试剂盒

酒精PBSCaCl2醋酸

实验步骤

1.  用盖片单层培养细胞,从瓶中取出后速用温Hanks液漂洗3~5 秒,以去除培养基中血清(于此步可进行直接染色观察活细胞);


2.  投入95 %酒精或醋酸/甲醇固定15~30 分钟,微干(盖片边缘接触滤纸);


3.  1 %醋酸作用30 秒;


4.  1×10-4 吖啶橙染30 秒或1 分钟;


5.  0.1 M CaCl2处理30 秒~2 分钟;


6.  PBS漂洗3 次,每次数秒;


7.  PBS封片,荧光显微镜下直接观察并拍照。

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注意事项

1.  观察中应随时填加PBS以避免标本干涸:如用油浸镜观察,需再覆以大盖片盖在附有细胞盖片上(细胞面朝上),用无荧光性油浸观察。

2.  标本在95 %酒精中能保
存数日后仍可观察,如退色,再用AO染色。镜下观察,DNA呈翠绿色,RNA呈火红色。


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