高效液相色谱柱后化学衍生法测定食品中的VB1及叶酸含量
高效液相色谱柱后化学衍生法测定食品中的VB1及叶酸含量
摘 要 研究柱后化学衍生荧光检测高效液相色谱分离测定食品中维生素B1 和叶酸的方法。采用C18柱,以含有3. 5 %乙腈的pH5. 0 磷酸盐缓冲溶液(0. 05mol/ L) 作为流动相反相分离。色谱流出液在柱后与0. 4 %的过二硫酸钾溶液在线汇合后流经一Teflon 管化学反应器时,维生素B1 和叶酸转化为强荧光产物,由荧光检测器测定。在最佳条件下,进样20 μL ,维生素B1 和叶酸工作曲线的线性范围分别为0. 21～4. 2 mg/ L 和0. 10～2. 0 mg/ L ,峰面积的相对偏差均为2. 0 % ,回收率及实际样品测定结果满意。
维生素对于人类健康是必不可少的,而人体自身又无法合成这些化合物,因此必须通过食物链或服用复合维生素制剂予以补充。相对于其它水溶性的维生素来说,不论是在天然的还是在强化的食品中,维生素B1 (VB1) 和叶酸的含量都是比较低的[1 ] 。测定食品中VB1 的经典方法是经离子交换柱分离共存的干扰物质后,在强碱性条件下,用K3Fe (CN) 6 将其氧化为硫色素,再经异丁醇萃取、荧光光谱法测定[2 ] 。近来,荧光检测高效液相色谱法( HPLC) 测定食品中的VB1 越来越受到重视。但不论是柱前[3 ,4 ]还是柱后[5 ]化学衍生,均离不开有毒试剂K3Fe (CN) 6 及高浓度的强碱。Guo[6 ]等首先报道了VB1 的光化学荧光法,随后又有人把这种方法应用于食品中VB1 的测定[7 ] 。但是由于光化学反应器日常应用较少,而且同样需要在强碱的条件下反应。
在研究过二硫酸钾柱后衍生高效液相色谱法测定叶酸时,发现过二硫酸钾同样在温和的条件下,可
以将VB1 氧化后发出荧光,并且它们的激发和发射波长很接近。通过优化色谱和化学反应的条件,研究建立了柱后化学衍生荧光检测高效液相色谱法同时测定食品中的VB1 和叶酸的方法,应用于实际样品测定,结果满意。
