一文看懂液相色谱仪（一）
Hello大家好，
作为奋战在实验室的一线实验猿，
跟大家分享一下，
关于HPLC的经验与心得。
HPLC是上世纪六七十年代发展起来的新型分离分析技术，广泛应用在制药、化工、环境、食品等领域，各行业实验室均能看到大量HPLC身影。
HPLC系统由脱气机(内置、外置)、泵、自动(手动)进样器、柱温箱(选配)、检测器、数据处理系统等模块构成。
色谱相关理论在《学习液相，必须要知道的三大理论》中有介绍，这里就不赘述了。
以下是老赵头个人经验总结，仅供参考，欢迎批评指正。
HPLC实验室管理
1、人员的培训与管理
参与实验室管理的人员应对仪器足够了解，如有条件应参加厂商的高阶培训，熟练使用与维护仪器。凡申请使用仪器的人员应接受相关培训，对学过《仪器分析》课程的申用人可着重讲解使用中应注意的问题，对于未学过《仪器分析》课程的申用人可先在教学平台中学习相关课程，并接受强化培训后方可使用仪器，避免不熟悉仪器直接使用对仪器造成不可修复的破坏。
机器的管理
针对每台仪器建立档案及标准操作规程SOP
每台HPLC档案需包括：品牌、产地、主体流路材质(兼容溶剂)、耐压范围、正相系统或反相系统(主要看泵密封圈材质)、客服电话、对应维修工程师及应用工程师的联系方式。保证出现问题时快速联系获取解决方案，将仪器的损害尽可能的降低。
HPLC主体流路材质一般有不锈钢SST、钛Ti或MP35N(MP35N合金是一种无磁的镍钴铬钼合金)，普通液相系统无特殊说明一般为不锈钢系统，钛或MP35N多用于BioHPLC系统中，比不锈钢系统更耐腐蚀，和更好的生物兼容性。
针对每台仪器编写完整的操作规程，应涉及到电压、开关机顺序及注意事项，使用人在申用仪器时应注意仪器的情况，发现问题及时记录并上报。对仪器的使用和维护记录严格审核。
物料管理
所有进入液相色谱系统的溶剂均应是色谱纯，样品应经过相应的前处理，确保样品的洁净度，不会堵塞和污染系统。使用的进样小瓶规格要与自动进样器匹配，瓶子隔垫要与样品溶剂兼容。如需过滤，应选择与溶剂兼容的滤膜材质，避免滤膜溶胀或反应等结果导致样品污染或系统堵塞等问题。
相关规定
(1)仪器申用的规范化预约：有电子平台在电子平台上申请预约，没电子平台可制定手工或电子台账记录具体情况。
(2)制定并严格执行实验室管理规定。
(3)严格按照仪器SOP规定使用。
(4)完善使用记录的书写，执行复核审查。
(5)仪器的维护规程的制定与执行。
环境要求
仪器使用环境应无尘，通风良好，温度保持在(15-30)℃，室内相对湿度应在5%-85%范围内，仪器应平稳的放在试验台上，周围无强烈机械振动和电磁干扰源。电压应符合响应厂商的安装使用要求。
HPLC维护
目前各厂商生产制造的液相色谱仪主要分两类，一类是一体机，另一类是模块化分体机。一体机体积小巧、安装、移机便捷;分体机维修方便，各有优势。对于这两类液相系统总体维护是相似的。
液相色谱系统分为脱气机(包括内置和外置两种)、泵、自动进样器(手动进样阀)、柱温箱、检测器等功能模块。
1、脱气机的维护：
为避免脱气机污染：应严格过滤并定期更新溶剂，定期润洗脱气机溶剂通道，对于走水相的通道这点非常重要。使用有机溶剂充分的润洗所有通道(使用干净的溶剂瓶)，在使用水和乙腈或甲醇作为流动相时每周充分润洗脱气机通道一次。然而在色谱中反复出现鬼峰时，应及时调整润洗周期，并按下面的步骤进行相应的润洗。
在泵出口安装背压管，并调整压力至200-300bar
用20%的硝酸在常规流速下冲洗1小时(使用新鲜的HPLC级水)
用HPLC级水润洗通道知道PH测试为中性
再用HPLC级乙腈在常规流速下润洗2小时
用干净的溶剂瓶装上新配置的流动相并与脱气机连接
安装新的溶剂过滤器
拆除背压管并重新按照要求连接系统
平衡系统
有些品牌的液相色谱仪只有反相脱气包，当使用正相系统时，要求短接脱气机。有些品牌亦有正相脱气包，使用时应注意，避免溶剂对脱气包材质造成不可逆的损坏。
2、溶剂吸滤头维护
室温较高时，使用纯水相或有机相比例较低时，流动相应临用现配及时清洗吸滤头以防吸滤头堵塞。
定期检查溶剂过滤头，尤其是水及相似溶剂作为流动相时，细菌等微生物及其代谢产物容易沉淀堵塞滤头。所以定期更换溶剂，并在清洁溶剂瓶后重新装入新的溶剂，必要时，更换新的溶剂滤头。
3、泵的维护
泵的易损件主要为单向阀、过滤白头、柱塞杆、柱塞密封圈等，做好泵头的维护，反相系统使用缓冲盐时应使用seal wash清洗，如没有自动后密封清洗系统，可以手动清洗，当使用正相系统时选择适宜的溶剂清洗。
应注意有些品牌的后密封清洗系统的溶剂瓶是循环的，有些品牌是非循环利用的，对于循环式的后密封清洗系统应定期更换储液瓶中的溶剂，避免溶剂中缓冲盐浓度过高起不到清洗的作用，以及溶剂瓶中滋生微生物。对于非循环的溶剂瓶除了定期更换溶剂外还应注意，不要让溶剂瓶中的溶剂跑空。
如果要使用了高浓度盐类流动相(通常最大不超过1moL/L)，在后密封清洗系统没有充分运行(大于5min)的情况下，严禁运行泵，否则将造成柱塞杆及柱塞密封的损坏。
泵的部件中有peek(聚醚醚酮)材质组件，在使用氯仿CHCL3，四氢呋喃THF，二甲基亚砜DMSO等溶剂时，peek材质的管线或其他部件会发生溶胀现象，建议更换耐受以上溶剂的不锈钢备件或钛或者MP35N等材质的备件。
4、Purge阀维护
不要用工具来拧紧purge阀，过紧可能会损坏密封垫，并且必须在系统压力为0时的情况打开或者关闭purge阀。
5、在线过滤器
purge中含有在线过滤器，当系统背压高时考虑更换新的在线过滤器滤芯。有些品牌是主动阀或者被动阀，需要更换阀中的过滤白头。
通常情况下，泵的柱塞密封垫由极高分子量聚乙烯(UHMW-PE)材料制成。当使用氯仿、三氯代苯、二氯甲烷、四氢呋喃或甲苯做溶剂时会对UHMW-PE密封垫造成化学损伤。在使用四氯化碳、二乙醚、乙醚、二异丙醚、酮类、甲苯、甲基环已胺及氯苯时还可能发生化学反应。不同制造商的密封垫材质有不同，有些是PTFE材质的还有石墨的。
6、自动进样器的维护
不同品牌的自动进样器结构有所差异，应详见厂商说明书做好维护。洗针液应定期更换，当使用内插管进样瓶时，应及时调整进样针高度，避免对硬件造成损伤，当出现进样体积重复性不好的情况时，排除仪器故障问题，由于进样瓶内负压造成的，对于高沸点难挥发的样品可选用欲开口进样隔垫。
定期检查进样针位置，防止进样时扎偏损坏硬件。
