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荧光光谱仪的优点和原理介绍

2020.3.13

荧光光谱仪又称荧光分光光度计,是一种定性、定量分析的仪器。通过荧光光谱仪的检测,可以获得物质的激发光谱、发射光谱、量子产率、荧光强度、荧光寿命、斯托克斯位移、荧光偏振与去偏振特性,以及荧光的淬灭方面的信息。

 

荧光光谱仪灵敏度高,无破坏性和选择性好,是研究小分子与核酸相互作用的主要手段,被广泛应用于化学、环境和生物化学领域。

荧光光谱仪原理:

根据物质分子吸收光谱和荧光光谱能级跃迁机理,具有吸收光子能力的物质在特定波长光(如紫外光)照射下可在瞬间发射出比激发光波长长的荧光,利用物质的荧光光谱进行定性、定量分析的方法称为荧光分析法。荧光光谱辐射峰的波长与强度包含许多有关样品物质分子结构与电子状态的信息,但外界因素对其荧光强度结果有一定的影响。

当某些物质受到紫外线照射时,会发射出各种颜色和不同强度的可见光,当紫外线停止照射时,所发射的光线会随即消失,人们将这种光线称为荧光。荧光由一种能发荧光的物质-萤石而得名。荧光的产生主要包括物质分子对光能的选择性吸收、激发和分子的去活化三个过程。

光在通过物质的过程中,由于某些频率的光被吸收而强度减弱,这一现象被称为物质对光的吸收。原子、分子或者离子都具有不连续的、数目有限的量子化能级结构,且只能吸收与两能级之差相同或为整数倍的能量。当所照射的光线和所被测物质的分子具有相同的频率时,入射光才能够该物质的分子所吸收。由于不同物质的特征能级不同,所以它们所吸收的光的波长和颜色也是有区别的,即它们所吸光能量也是不一样的,每种物质都有其特有的吸光光谱。

荧光时物质在吸收入射光之后所发射的辐射,因此,溶液的荧光强度与该溶液的吸收的入射光强度以及该物质的荧光量子产率有密切关系。荧光强度取决于激发态的初始分布与荧光量子产率的大小。


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