ELISA实验质量控制问题（二）
1.3 室内质量控制程序
临床检验的检测结果，每次或每天之间不可能没有误差。决定允许的误差范围，以临
床上不造成误诊与漏诊为准，通过以下步骤来确定质控范围。
1） 最佳条件下的测定误差。
2） 已知值的血清在常规检验条件下的误差。
3） 未知值的血清在常规检验条件下的误差。
4） 临床应用的要求。对任何一个试验都应确定一个允许的误差范围，前题是满足临床要
求。如允许误差定得过小，在临床上不存在任何意义，但为了符合该规定却要花费很大人
力、物力和时间。相反，如果将允许误差定得过大，将使监测系统察觉不到临床上要求检
出的误差，失去质控的意义。
1.3.1 最佳条件下已知值质控血清变异（optimal conditions variance,简称OCV）的测定
在本实验室最佳条件下（包括操作者、试剂、仪器等）检测质控血清20-30次，测得
结果计算，求出该组数据的均值和标准差（SD）表示该实验室的最佳工作质量。
现举例说明HBsAg ELISA法检测时OCV的测定。使用的质控制血清为临界血清，
HBsAg浓度为5ng/ml。在该实验室中选择素质最好、操作最熟练的技术员进行认真地专门
测定，选用最佳的试剂盒，检测之前，将恒箱、加样器等认真校正、调校正、调试，使用
新的加样吸头等，即在最佳、最理想的条件下进行检测。除质控血清外同时测定阴性对照
品和阳性对照品。并作双份测定，得出2个吸光值（A值），求出X。连续作20次，求出20
个X，即X1……X20。从这20个数据中，求出OCV的X和SD。
1.3.2常规条件下已知值质控血清变异（routine conditions variance-known value,简称
RCVK）的测定。
做常规检验的技术人员，在常规检验的条件下，将质控血清放在常规检测样本中，进
行20次检验，结果计算同OCV法。一般认为RCV的SD在OCV的SD两倍范围内可以接受。
若太大应该查找原因，使其向OCV的SD值靠近。在改进实验室条件后（例如较正加样
器，纠正洗板操作，调正温育温度等），重新进行RCVK的测定。如果RCVK的SD值更
小，说明OCV不是最佳条件下测定的，应重新再测OCV。常规条件下，RCVK肯定要比
OCV大。通过质控控制各项条件，使RCVK的数据尽可能接近OCV值。RCVK的数据反映
该实验室日常工作的质量，用于作质控图，对室内检验的结果进行控制，每日检验的结
果，报告能否发出。
1.3.3常规条件下,未知值质控血清变异(routine conditions variancl-unknown value 简称
RCVU)的测定
有时为了避免主观性,再作RCVU测定。
测定步骤同RCVK，但检测的操作者不知质控血清的定值，或在操作者不知哪份是质
控血汪清的条件下进行常规检验，以排除操作者的主观性。在此不再举例说明。
1.3.4质控图
通过以上三步骤，可以开始作室内质控图，根据RCVK的和SD作质控框图。利用质控
图可以对每次检验的结果进行监测，当没有更换另一批号试剂盒和另一批号质控血清时，
该质控图可以连续作下去。
质控血清的S/CO值低于-2SD的范围,属"告警"，应寻找原因并在质控图上记录查出的
原因。
ELISA试验中，各种检验项目的误差允许范围均有待在实践中得出结论，以上只是举
例说明质控方法，不是定论。2SD是一般公认的允许误差限度。每批测定放一份质控血清
时，一次超过2SD应作为"告警"，二次超出2SD为"失控"。当质控过程中，出现失控时，出
现失控时，应查找原因，通常是试剂盒或质控血清失效造成。更换试剂盒或更换质控血
清，找出原因纠正后重新检验。如果检验结果仍达不到要求或找不到原 因时，应重复进
行OCV的检验。如果OCV检验的结果仍是好的，说明常规操作出现问题。
一般认为：①一次超出3SD；②连续二次超出2SD；③3-5次连续处于一侧的2SD之内；
④5～7次连续偏向横轴的一侧，均为失控。
第③、④种情况，单独依靠记录往往是不易察觉的，但在质控图上可以清晰地发现这种失
控。
1.3.5统计学计算方法--"即刻性"质控
以上介绍的质控方法基本上与临床化学测定的质控方法相同，但ELISA有其特殊性，
最合适的质控方法尚待研究建立。有些实验室不是每天进行ELISA项目的检验，而ELSIA
试剂盒效期短，用一批号试剂盒连续常规测20次，难度较大。采用"即刻法"质控统计方
法，只需连续测3次，即可对第3次检验结果进行质控。
"即刻法"的建立具体计算方法如下：
1)先将测定值从小到大排列
2)计算X和SD。
3)计算SDI上限和SDI下限值。
4)将SDI上限、SDI下限值与SDI值中的数字比较。当SDI上限值和SDI下限值＜n2SD时，表
示处于控制范围内，可以继续往下测定，继续重复以上各项计算；当SDI上限和SDI下限
有 一值处于n2SD和n2SD值之间时，说明该值在2SD~3SD范围，处于"告警"状态；当
SDI上限和SDI下限有一值＞n2SD时，说明该值已在3SD范围之外，属"失控"。数值处
于"告警"和"失控"状态应舍去，重新测定该项质控血清和病人样本。舍去的只是失控
的这次数值，其他次测定值仍可继续使用。
即刻性质控统计方法，适于ELISA测定的质控。
当检测的数值超过20次以后，不必再使用"即刻法"质控统计计算，可以转入常规的质
控图的质控。将前20次的数值求出的和SD作质控框架图，第21次的数值，依次点入即
可。
1.4室间质量评价（external quality assessment,简称EQA）
室间质量评价简称室间质评，是由质控中心采用一系列的办法连续地、客观地评价各
实验室的试验结果，并发现室内质控不易发现的不准确性，了解各实验室之间结果的差
异，并帮助校正，使具有可比性。各实验室试验结果报到质控中心，经过统计分析，得出
相互比较的结果。这种评价不能控制各实验室每天发出的检验报告，而是一种回顾性评
价。室内质控主要监测试验结果的精密度，而室间质评主要控制试验结果的准确度，不能
互相替代。参与质评的实验室应先做好室内质控。
1.4.1室间质评的方法
1、 发质控物进行调查
这是国内外室间质评的常用形式。部临检中心对乙肝标志物ELISA检验的室间质评采
用定期发放质控物至各实验室，各实验室在规定的日期进行检验，并将检验结果报至部临
检中心。部临检中心经统计分析，将评价结果寄回各实验室。通过评价，各实验室了解本
室工作质量，发现差距，并设法改进，以不断提高检验质量。
这种评价方式有一定缺点，即各实验室常对质控物特殊对待，在检验时选用特殊试剂
盒，选派特别的技术员进行检验，有的实验室互相和对结果并作修改。这就使EQA的结果
不能反映该实验室日常工作水平。
2、 派观察员到实验室进行试剂调查
这种调查事先不通知，临时派观察员到实验室，指定采用常规方法，检验规定的一组
标本，进行评价。
这种调查方式，容易发现该实验室存在的实际问题，可以直接给予指导和帮助，解决
问题，提高检验质量。这种调查通常可以使用真实样本，避免采用质控物的一些缺点。
