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胎牛血清实验的常见问题

2020.8.31

一、怎样选择适合我们实验室的血清?
国内一致认为hyclone的血清是的,但国外一般认为gibco比hyclone好,所以并不是价格
决定质量,但是总的来说这两种价格普遍偏贵,一般不是太娇气的细胞,国产的就够用了。此外,由于国内hyclone,gibco并没有生产线,需要到代理商买。

二、如何避免血清中产生沉淀?
1.解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。
2.血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。
3.勿直接由-20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
4.勿将血清置于37℃太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受
到破坏,从而影响血清的品质。
5.血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。
6.若必须做血清的热灭活,请遵守56℃,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间
过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

三、细胞培养中如何防止黑点生成?
1.尽可能地减少血清冻融次数;
2.培养基无需37℃水浴;
3.培养基保持*佳ph值7.0-7.2;
4.严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗;
5.掌握细胞传代的*佳时机,细胞切勿生长过老。


四、怎样储存和解冻胎牛血清才不会使产品质量受损?
将血清从冷冻箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室温下使之全融。但必须注意的
是,融解过程中必须规则地摇晃均匀。长时间储存在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此,推荐在-20℃以下储存血清,并避免反复冻融。
上海劲马免疫学研究检测中心建议:血清应保存在-2o℃。若存放于4℃时,请勿超过一个月。
若一次无法用完一瓶,建议无菌分装血清至恰当的灭菌容器内,再放回冷冻。

五、听说热灭活并非必须要做的步骤,是真的?
是。通过实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理
过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点",常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37℃环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物 的分裂扩增。若非必须,可以需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!

六、培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?
一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素
和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

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