液相色谱峰分叉了，怎么办？
做液相色谱的同学基本都会碰到分叉峰
很多时候
这都意味着硬件或者方法某些地方可能出现问题
今天我们就一起看看导致峰分叉的原因
以及如何解决这个问题
首先，我们需要判断
这到底是一个峰，还是两个峰?
A图主峰前面有一个肩峰
这到底是峰形不好
还是另外一个化合物没分开呢?
判断方法
降低该成分在样品中的浓度
B图是降低该成分浓度后
进样后得到的色谱图
如果这是一个峰
那肩峰也应该响应变小
但是这个例子里
肩峰没有变小
这应该是另外一个化合物
这时候，我们就要考虑如何改变方法
将这两个东西分开
如果所有峰的峰形都不好
一般来说
一个样品都会出多个峰
峰形不好，绝大多数时候
在每个峰上面都会出现
比如像下面这样:
A图是所有峰都拖尾.
B图是所有峰都有肩峰，
也可以说峰分叉
这种情况一般都是色谱柱头塌陷
或者柱头的筛板被堵导致的
为什么会导致峰形问题呢？
请看下面的图
A图是正常的柱头
B图是筛板被堵的柱头
正常情况下
所有样品分子都是均匀通过色谱柱
形成一个对称的峰形
堵塞的情况下
有一部分样品分子进入色谱柱就会受到阻扰
导致时间拖后，形成拖尾
对于色谱柱塌陷的情况
用同样的方法大家也不难理解
只不过这时候
是一些样品分子可能跑的比正常的快了一些
如何解决这个问题呢？
01
反冲
柱出口放空，
冲20-30ml流动相。
虽然柱子上都有表明使用方向，
但是对于硅胶基质的色谱柱
基本都可以反冲。
将柱头污染物
如泵密封圈的碎屑，
样品中的污染等冲走，
就能解决问题。
当然，还是要提倡大家注意
样品上机之前的前处理
和及时更换磨损的泵密封圈。
有条件的还是用保护柱，
大不了就换保护柱，
也比换色谱柱强。
02
更换或清洗筛板
现在估计做这个事情的人不多，
但是谁有废柱子，
想练练也未尝不可。
我们一起看看一个实际的例子：
根据之前说的，
可能是柱头堵了，
或者塌陷了。
但是进一步检查，
发现另有原因。
方法用的150 mm 4.6 mm, 5 um C18 柱子，
78% 乙腈，1.5ml/min，等度方法，
进样10ul，100%乙腈溶解的样品。
一般来说，
虽然10ul的纯乙腈不会引起峰形不好，
但是有时候样品溶剂的极性跟流动相差异较大时，
的确会引起峰形的问题。
我们怎么办呢？
01
从最容易的办法做起，
降低溶剂乙腈的比例，
降到50%看看。
从下图B，4min的峰可以看出，
没啥改观。
02
接下来反冲柱子，
结果如图C，
基本没变化。
算了，明天再说吧。
03
第二天来到实验室，
还能干嘛呢?
更换筛板?
算了，直接换柱子吧！
结果如D，
噢，好很多噢。
之前柱子肯定有问题，扔了。
但是峰还是有点宽，
估计还是哪儿有问题。
手上忙，没时间管这个。
04
几天过后，
重新配了流动相，
一跑，好了，如图E。
虽然到底什么原因导致之前峰形的问题，
已经无从查找
（柱子扔了，旧流动相也没了），
但是也给我们提供了一个解决问题的步骤：
1
确定峰形问题
是所有峰都有问题，
还是就是某一个峰有问题。
如果所有峰都有问题，
基本都是色谱柱，
或者仪器管路连接的问题。
如果是某一个峰有问题，
那就要从方法上来考虑，
是否需要改变流动相比例，
pH值，色谱柱温度等等。
2
从最简单的做起
从不需要换什么东西的方法做起。
比如改变样品溶剂，
反冲色谱柱等等。
3
换东西
换保护柱，换色谱柱，
换流动相(新配)，
一步一步的换，
有助于找到问题的根本。
4
总结经验
问题解决后，
想想需不需要采取什么措施，
防止类似问题的发生，
比如说常换流动相啦，
即时更换密封圈啦，
记录进样次数
了解什么时候色谱柱就不行了啊之类的。
希望以上信息能够让各位同学
在碰到峰形不好的问题时，
有一些思路，
不至于手足无措。
