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配制电解质梯度胶实验

2019.3.26

Sheen 和 Seed(1980) 创造了一种既聪明又简单的改进方法,利用顶部和底部不同浓度的电泳缓冲液在胶中产生离子梯度,而胶本身的浓度是一定的。利用此法,从单块凝胶上可以读取的核苷酸总数可增加约 30%。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。


试剂、试剂盒

本方法包括方案 8 中所有物品加上: 甲酰胺(100%)离子梯度胶醋酸钠

实验步骤

材料

本方法包括方案 8 中所有物品,加上:
甲酰胺(100%)

离子梯度胶用 1XTBE 配制,有无甲酰胺均可。关于含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝胶,请见方案 9。

醋酸钠(3mol/L,PH7.0)

方法

1. 依方案 8 步骤 1~8。

2. 在实验桌的工作区上铺上衬塑料的保护纸。

3. 参照方案 8 或 9 配制变性聚丙烯酰胺凝胶。

4. 将胶放在电泳装置中。在上槽中加入 0.5XTBE 缓冲液,在下槽中加入 1 份 3mol/L 醋酸钠和 2 份 1XTBE。按照方案 11 操作。
电泳时,指示染料的移动逐渐变慢,当溴酚蓝到达底部时,移动几乎停止。一般,继续电泳直到二甲苯蓝离底部只有 5~10 cm 而溴酚蓝到了底部。
推迟加入 3mol/L 醋酸钠可以调整压缩 DNA 条带的时间。电泳开始时,上下槽都用 1XTBE; 在适当时候,在下槽加入一半体积的 3 醋酸钠。根据经验,这样可以压缩条带的不同区域,读出最多的条带。


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