注：

1、 试剂准备：所有试剂在使用前应平衡至室温，使用后请立即按照说明书要求保存试剂。实验操作中请使用一次性的吸头，避免交叉污染。

2、 加样：加样或加试剂时，*个孔与最后一个孔加样之间的时间间隔如果太大，将会导致不同的 “预温育"时间，从而明显地影响到测量值的准确性及重复性。一次加样时间（包括标准品及所有样品）最好控制在10分钟内。推荐设置复孔进行实验。

3、 温育：为防止样品蒸发，实验时将加上盖或覆膜的酶标板置于湿盒内，以避免液体蒸发；洗板后应尽快进行下步操作，任何时侯都应避免酶标板处于干燥状态；同时应严格遵守给定的温育时间和温度。

4、 洗涤：洗涤过程中反应孔中残留的洗涤液应在滤纸上拍干，勿将滤纸直接放入反应孔中吸水，同时要消除板底残留的液体和手指印，避免影响最后的酶标仪读数。

5、 试剂配制：Detection A及Detection B在使用前请手甩几下或少时离心处理，以使管壁或瓶盖的液体沉积到管底。标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液请依据所需的量配制使用，并使用相应的稀释液配制，不能混淆。请配制标准品及工作液，尽量不要微量配制（如吸取检测溶液A时，一次不要小于10 ），以避免由于不准确稀 释而造成浓度误差；请勿重复使用已稀释过的标准品、检测溶液A工作液、检测溶液B工作液。

6、 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔的颜色变化（比如，每隔10分钟），如颜色较深，请提前加入终止液终止反应，避免反应过强从而影响酶标仪光密度读数。
7、 底物：底物请避光保存，在储存和温育时避免强光直接照射。
    
洗板方法

1、 手工洗板方法：将推荐的洗涤缓冲液至少0.4ml注入孔内，浸泡1-2分钟，吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体，在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；根据需要，重复此过程数次。

2、 自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
 
特异性

本试剂盒可同时检测重组或天然的大鼠INS，且与其它相关蛋白无交叉反应。
 
计算

各标准品及样本 值扣除空白孔 值后作图（七点图），如设置复孔，则 应取其平均值计算。以标准品的浓度为纵坐标（对数坐标）， 值为横坐标（对数坐标），在对数坐标纸上绘出标准曲线。推荐使用专业制作曲线软件进行分析，如 curve expert 1.3，根据样品 值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 值计算出标准曲线的回归方程式，将样品的 值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
 
检测范围：0.625 mIU/L - 40 mIU/L，绘制标准曲线请取用以下浓度值： 40 mIU/L，20 mIU/L，10 mIU/L，5 mIU/L，2.5 mIU/L，1.25 mIU/L，0.625 mIU/L。
 
最低检测限：0.156 mIU/L
 
说明：

1、由于现有条件及科学技术水平尚不能对所有供货商提供的所有原料进行全面的鉴定与分析，本产品可能存在一定的质量技术风险。

2、最终的实验结果与试剂的有效性、实验者的相关操作以及当时的实验环境密切相关，请务必准备充足的标本备份。

3、在储存及温育过程中避免将试剂暴露在强光中。所有试剂瓶盖须盖紧以防止蒸发和微生物的污染，因为蛋白水解酶的干扰将导致出现错误的结果。

4、试剂盒保存：请收到试剂盒后尽快将标准品、检测溶液A和检测溶液B保存于-20 ，其余试剂短期保存请置于4 ，长期保存则置于-20 。开封后的酶标板要密封加干燥剂后保存于-20 ，避免潮湿。
5、浓洗涤液会有盐析出，稀释时可在水浴中加温助溶。

6、刚开启的酶联板孔中可能会有少许水样物质，此为正常现象，不会对实验结果造成任何影响。

7、有效期：6个月。

8、本操作说明适用于48T试剂盒，但48T试剂盒所有试剂减半。