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血清污染和过滤的问题

2020.4.13

1、问:怀疑购买的Gibco胚胎干细胞专用胎牛血清(Gibco ES专用胎牛血清)染菌,想用滤膜过滤一下,可否自己用0.22μm滤膜过滤?对血清性质有多大影响?有做过的么?

答:可以过滤的,血清当出厂时都是0.22μm或0.1μm过滤除菌。想证明有没有染菌不用过滤这么麻烦,只要放置于37℃过夜就可以了,如果有微生物污染会变浑浊的,如果还是澄清的就说明没有问题的。实验室中血清很难直接过滤,一般要加到培养基中再过滤。我们实验室制备培养基时,都使用滤膜过滤,一般而言如果制备1-2瓶培养基,一个滤膜及一支30ml注射器可以过滤50ml小牛血清。如果大量制备培养基也可以将血清加到培养基中,使用0.22微米的大滤膜一起过滤。

2、问:我怀疑我用的完全1640培养液被污染了,准备重新过滤消毒,过滤后是否需要补充胎牛血清?如需又如何补充?

答:完全1640培养液被污染了,如果是支原体的话,过滤没有作用,支原体可以通过滤膜。我们用1640液,都是配液后保留500ml,然后其他的分装100-200ml,现用现配因为血清比1640要贵,如果你想过滤的话,建议你加原比例血清,因为Gibco牛血清不会很容易通过滤膜。最主要的还是找到可能污染的原因。

3、问:加好了Gibco牛血清双抗的培养基由于污染了再过滤后还能用吗?

答:建议不要用了。在加了双抗的情况下已经污染,那么细菌污染的可能性会较小了。一般的过滤除不能去除病毒或者部分真菌的污染的。

4、问:我准备把使用的完全1640培养液重新过滤一遍,不知道培养液中的血清成分是否能通过滤膜,过滤后是否还需要补充胎牛血清?如需又如何补充?

答:可以透过,但是随着液体量的增多会很慢,如果不加压会比较麻烦,还有最好用低蛋白吸附的,不然损失是比较大的。


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