（3）什么情况下的样本OD值被认为是可用的？

       处方：只要样品的OD高于NC的数值，该数据仍可用于计算m6A水平。

     （4）重复孔之间差异较大怎么计算？

       处方：对于重复孔之间差异较大，我们若是重复孔3个以上的话，我们一般会选择舍弃其中差异特别特别大的一个值后再进行计算，但是只有2个孔的话，该怎么办呢？这个时候我们不能随便舍弃任何一个孔的值，同样也没有办法提供相关的建议。但是需要注意：p-9005比色测定的%CV约为15%。

       4.病症四：稀释

     （1）需要稀释的试剂组分如何稀释？

       处方：按照说明书上给的配制比例进行稀释，用TE buffer稀释，建议即用即配，计算好所需的量再进行稀释配制。

     （2）为什么有些组分稀释后需要放置在冰上？

       处方：使用前应将稀释的成分（例如PC标准品）放在冰上，以最大程度地减少试剂降解并保持试剂完整性。

     （3）稀释液必须是TE吗？可以替换成DEPC水或者无RNAase的水吗？

       处方：可以使用DEPC水替代TE buffer，无RNAase的水也可以。

       5.其他

      （1）所有组分需要放置在室温条件下回温吗？

       处方：对于产品组份中的Wash buffer，保存在低温下可能会有盐离子等沉淀，在使用前需要将其拿至室温进行回温，沉淀即可溶解，这样可进行正常的实验。

     （2）如何减少复孔间差异？

       处方：

       【1】在板中垂直而不是水平地加载复制样品，因为这可以确保同时添加溶液以复制孔，并有助于最小化复制差异。

       【2】确保从孔中完全去除洗涤缓冲液，因为任何残留的缓冲液都会增加背景信号和重复变异性，尤其是在敏感的ELISA中（例如用于甲基化检测的ELISA）。

       【3】使用手动移液器代替典型的板轻拂/倾倒方法，以确保完全去除缓冲液并最大程度减少孔间污染。

       （3）有相关的参考文献吗？

       说道参考文献，不仅有，而且非常多，还是处于实时更新的状态，日期都非常的新（https://www.epigentek.com/catalog/epiquik-m6a-rna-methylation-quantification-kit-colorimetric-p-3646.html）：

       Tsuruta K. et. al. et. al. (September 2020). RNA N6-methyladenosine demethylase FTO regulates PD-L1 expression in colon cancer cellsBiochemical and Biophysical Research Communications. 530(1)

       Chen S et. al. (August 2020). WTAP promotes osteosarcoma tumorigenesis by repressing HMBOX1 expression in an m⁶A-dependent manner.Cell Death Dis. 11(8):659.

       Xu Y et. al. (August 2020). The FTO/miR-181b-3p/ARL5B signaling pathway regulates cell migration and invasion in breast cancer.Cancer Commun (Lond).

       Du J. et. al. et. al. (August 2020). N 6-Adenosine Methylation of Socs1 mRNA is Required to Sustain the Negative Feedback Control of Macrophage ActivationDevelopmental Cell.

       Zhang S et. al. (August 2020). Pregnancy carbon black nanoparticles exposure-induced neurobehavioral deficits are associated with m6A modification in offspring.

       Yang Z. et. al. et. al. (August 2020). RNA N6-Methyladenosine Reader IGF2BP3 Regulates Cell Cycle and Angiogenesis in Colon CancerGeneral Surgery.

       Zhu S et. al. (July 2020). Dexmedetomidine Suppressed the Biological Behavior of HK-2 Cells Treated with LPS by Down-Regulating ALKBH5.

       Jian D et. al. (July 2020). METTL14 aggravates endothelial inflammation and atherosclerosis by increasing FOXO1 N6-methyladeosine modifications.10(20):8939-8956.

       最后，温馨提示：这个产品p-9005是有配套的中文说明书的，但是还请各位同学们拿到产品后，认真阅读英文说明书喔，英文说明书为主，中文说明书为辅。

       以上就是小编整理的同学们常问的有关这个试剂盒的问题，各位同学若是有以上问题，可以借鉴哟~~