Feulgen反应(Feulgen reaction)是显示DNA的最典型的组织化学反应，为学者Feulgen和Rossenbeck于1924年发明，简称为Feulgen法。因对 DNA的显示反应具有高度专一性，故常被用来显示细胞内DNA的分布情况。 1．实 验 目 的 1．1. 熟悉并掌握Feulgen反应的原理及其实验操作方法 1．2. 对细胞的免疫组化研究方法有一初步的认识 2．实 验 原 理 自Feulgen等发明该显示DNA的Feulgen反应法以来，其作用机制也久经研究和讨论，现已取得一致意见。其具体反应原理是，标本经稀盐酸水解后，DNA分子中的嘌呤碱基被解离，从而在核糖的一端出现了醛基。Schiff试剂中的无色品红可与醛基反应，形成含有醌基的化合物分子, 因醌基为发色团，故可呈现出紫红色。也就是说, DNA经稀酸水解后产生的醛基，具有还原作用，可与无色品红结合形成紫红色化合物，从而显示出DNA的分布。其反应机制如下图所示。 2HCl+Na2S2O5→2NaCl+SO2+H2SO3 3．实 验 用 品 3．1 器材 显微镜20台、立式染色缸80个、水浴锅1台。 3．2 材料 香柏油5瓶，擦镜纸5本，镊子5把，盖玻片20片，用carnoy’s固定液固定的肝脏和精巢切片20片。 3．3 试剂 3．3．1. schiff氏试剂 将0.5g碱性品红置入三角烧瓶内沸腾的蒸馏水中，时时摇动玻璃瓶，煮沸5min使之充分溶解，冷却至50℃时过滤，加入10ml 1mol/L HCl，冷至25℃时，加入0.5g偏重亚硫酸钠(Na2S2O3)无水亚硫酸钠(NaHSO3)，在室温冷暗处至少放置24h(有时需2~3天)，使其颜色退至淡黄色，密封瓶口，藏于暗处，最好保存于4℃冰箱中(可保存数月或更长时间)。在使用前加入0.5g活性碳, 摇1min, 用粗滤纸过滤，滤液应为无色；若液体颜色变为粉红色，便不能再用。 3．3．2. 亚硫酸水(洗涤剂) 用200ml普通自来水(不要用蒸馏水, 以免引起误差)、10ml 10%的偏重亚硫酸钠水溶液和10ml 1mol/L HCl，三者在使用前混合，现用现配。 3．3．3. 1mol/L HCl(水解用) 取82.5ml比重为1.19的盐酸加蒸馏水1000ml即成(应将盐酸缓缓加入水中)。 3．3．4. 1%亮绿(light green) 亮绿1g，溶于100ml蒸馏水中。 3．3．5. 30%、50%、70%、85%、95%、100%的梯度酒精及二甲苯。 4．实 验 方 法 Carnoy液固定 ↓ 95% 酒精（2次）每次20-30min ↓ 100%酒精2次(30 min, 40 min) ↓ 二甲苯透明 ↓ 石腊包埋 ↓ 切片贴片 ↓ 二甲苯I(20 min) ↓ 二甲苯II(10 min) ↓ 100%酒精5min ↓ 95%酒精5min ↓ 85%酒精5min ↓ 70%酒精 5min ↓ 50%酒精5min ↓ 30%酒精5min ↓ 蒸馏水5-10min ↓ 1 mol/L HCl的染色缸内（清洗一下） ↓ 温浴至60℃的1 mol/L HCl溶液中水解8 min ↓ 取出标本，放入室温1 mol/L HCl溶液