血清甘油三酯的测定方法与标准化研究近况

血清甘油三酯/三酰甘油（TG）是一项重要的临床血脂常规测定指标，特别是随着对其致动脉粥样硬化（AS）作用研究的深入，TG作为冠心病的一项独立的危 险因素日益受到重视 [1～3]。但是目前血清TG测定及其临床应用尚存在很多问题，如生物学变异、游离甘油对测定的影响、测定的标准化系统不完善等等。本文仅对TG的生物化 学、测定方法与标准化、临床意义等方面的近况作一简述。

一、TG的生物化学

   TG又称中性脂肪，由3分子脂肪酸和1分子甘油酯化而成，是体内能量的主要来源。TG处于脂蛋白的核心，在血中以脂蛋白形式运输。除TG外，外周血中还存 在甘油二酯、甘油一酯（两者总和不足TG的3%）和游离甘油（FG）。各种脂蛋白中，乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）及其残粒被TG含量 高，被统称为富含TG脂蛋白（TRL），也称残粒样脂蛋白（RLP）。越来越多的临床与实验证据提示，TRL在AS病因学中扮演重要角色，可能作用于AS 病变早期[2,4]。

    TG的代谢可分为外源性和内源性两条途径。外源性途径指食物中的TG在小肠内水解成脂肪酸和甘油一酯、二酯后由肠粘膜吸收入细胞，再合成TG并与其他脂质 形成CM，通过淋巴系统入血。CM中的TG在脂蛋白脂肪酶（LPL）作用下水解为甘油和游离脂肪酸（FFA），被细胞利用或贮存。高脂饮食后3～6h，血 液中CM相关的TG达到峰值，脂肪的吸收速度因食物中脂肪的成分及个体差异而不同。内源性代谢途径指CM水解产物—CM残粒以受体介导的形式被肝脏吸收， 其衍生物和一些新组分合成VLDL。与CM水解类似，VLDL分泌到血液后被LPL水解成残粒，其中部分直接被肝吸收、分解，另一部分继续水解形成中间密 度脂蛋白（IDL），最后生成LDL。VLDL的合成与水解受多种因素调节，包括底物利用率、激素状态、水解酶的活性及一些特殊载脂蛋白辅因子的活 性。（图1）

图1 不同组织中甘油三酯合成的特点 小肠粘膜上皮细胞 
                 进餐后        空腹        肝脏         脂肪组织 
  主要合成途径  甘油-酯途径 磷脂酸途径  磷脂酸途径    磷脂酸途径 
a-磷酸甘油的来源 糖 否          可         可             可 
                甘油否          可         可             否 
主要中间产物  甘油二酯        磷脂酸     磷脂酸         磷脂酸 
甘油三酯可否贮存  否            否         否             可 
动员或分泌形式  乳摩微粒 极低密度脂度蛋白 极低密度脂蛋白 FFA+甘油 
生理功能     合成外源性TC   合成内源性TC 合成内源性TC 贮存甘油三酯

二、TG测定的方法学

    血清TG测定方法一般可分为化学法、酶法和色谱法3大类[6～9]。早期测定方法是以总脂质与胆固醇和磷脂之差估算。化学法用有机溶剂抽提标本中的TG， 去除抽提液中磷脂等干扰物后，用碱水解（皂化）TG，以过碘酸氧化甘油生成甲醛，然后用显色反应测甲醛。比较准确的是二氯甲烷-硅酸-变色酸法（Van Handel-Caslson法），此法抽提完全、能去除磷脂及甘油干扰、变色酸显色灵敏度高、显色稳定，至今还是美国疾病控制与预防中心（CDC）的内 部参考方法。但因操作步骤繁多、技术要求高而不适于常规工作应用。核素稀释/气相色谱/质谱技术（ID/GC/MS）主要用作参考系统中决定性方法的建立 及参考物质的制备与定值，此法费用昂贵，样品处理复杂，难以推广应用。（附

试剂组成 代号 种类 浓度 贮存2～8℃ 
R1 磷酸甘油氧化酶 ≥3.0KU/L 冷藏 
（A液） 抗坏血酸氧化酶 ≥1.0KU/L  
 甘油激酶 ≥0.7KU/L  
&nbsp4-氨基安替比林 80mg/L  
R2 脂蛋白脂酶 ≥2.0KU/L 冷藏 
 过氧化物酶 ≥10KU/L  
&nbspESPAS 300mg/L  
R3（参考液） 甘油酸三脂 200mg/dl（2.26mmol/L） 冷藏
    目前几乎所有的临床实验室都用酶法检测血清TG水平，虽然方法各异，但一般都包括3个基本步骤[3,5～7]：用最合适的LPL水解TG生成甘油和 FFA；接着是转化，该步骤一般只用一种酶，例如甘油激酶，将甘油磷酸化以进行下一步反应，或者生成中间待测物；最后是有色染料（常为醌亚胺等）或者紫外 吸收物质的形成，再通过分光光度法计算相应的TG浓度。如脂蛋白脂肪酶-甘油磷酸氧化酶- 过氧化物酶-4-氨基安替比林和酚法（GPO-PAP 法）等。此法具有简便快速、微量、精密度高的优点，且特异性强，易于达到终点，线性范围宽。用一步法测定的是血清总甘油酯（定义为TG和FG及少量甘油二 酯、甘油一酯之和，习惯统称为TG）。为了消除FG的干扰，中华医学会检验分会曾推荐GPO-PAP 法的两步酶法作为血清TG常规测定方法[7]，该法不增加试剂成本和工作量，适合自动化分析，由于试剂分成两部分加入，对正确设置分析测定参数有较高要 求。对此法能否去净游离甘油方面有人提出质疑。针对这一情况，近来中华医学会检验分会在《关于临床血脂测定的建议》文件中建议酶法如GPO-PAP 法作为临床实验室测定血清TG的常规方法。普通临床常规实验室可采用一步GPO-PAP法，有条件的实验室（如三级以上医院）应考虑开展游离甘油的测定 [1]