液相色谱法检测茶多酚中的咖啡因含量
一、仪器与试剂
1．1仪器
高效液相色谱仪，配紫外检测器。
1．2色谱条件
柱：c18，5 um，150 mmX4.6mm
流动相: 甲醇：0.067mol/L乙酸溶液40:60
流速：1.0ml／min
柱温：35℃
检测波长=286 nm
进样量：10出ul
1．3试剂
甲醇（HPLC），
三氯甲烷（A11）。
0.067mol/L醋酸溶液：4.0g醋酸，用蒸馏水固定体积为1000 ml。
咖啡因标准品：准确称取0.10009咖啡因（纯度>99.8%），用重蒸水定容1000毫升。溶液为1.0 mg/ml。
二、实验方法
2．1样品处理
以0.25≤1.0g样品加入2~3ml蒸馏水，加入10.0ml比色管，与10.0ml三氯甲烷准确混合，隔夜超声提取30 min(或离心15 min)，经0.45μm滤膜进行液相色谱分析。
2．2标准曲线、相关系数及检出限
咖啡因标准浓度系列分别为0.00、10.00、25.00、50.000、100.00、200.00和400.00ug/ml。在286nm处测定10ul的峰面积，绘制峰面积咖啡因浓度标准曲线，r=09998。检测限为2.0ug/ml（按仪器噪声响应值的3倍计算）。
三、结果和讨论
3．1流动相的选择
当GB/T5009.139.2003给出的移动相位用于确定时，出现标准峰的头分叉，这影响了确定结果。该方法给出的移动相峰值时间快，标准峰类型好。
3.2咖啡因在46毫升水中、75毫升乙醇、6毫升三氯甲烷和600毫升乙醚中的溶解度为1克,茶多酚的溶解度可溶于乙醇和乙酸乙酯中，不溶于三氯甲烷。根据不同的溶解度，茶多酚中的咖啡因可以得到很好的提取。
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