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微生物学检验基本技术（十）

2021.4.27

Crystal Anaerobe 厌氧菌４h
Crystal E/NF 肠杆菌科、某些革兰阴性非发酵菌 18~2４h
Crystal Gram Positive 革兰阳性球菌和杆菌 18~2４h
Crystal MRSA ID MRSA ４h
Crystal Neisserial/Haemophilus 奈瑟菌属、嗜血杆菌属、莫拉菌属、加德纳菌属、其它的苛养菌４h
Crystal Rapid Gram Positive 革兰阳性球菌和杆菌４h

Crystal Rapid stool/Enteric 革兰阴性肠道致病菌３h
Enterotube Ⅱ 肠杆菌科 18~24h
ID Tri-Panel 革兰阴性和阳性菌 16~20h；40~44h
MiniTek 厌氧菌、肠杆菌科、革兰阳性菌、奈瑟菌属、非发酵菌、酵母菌 4h（肠杆菌科、奈瑟菌属）
72h（酵母菌）

Oxi／FermⅡ 革兰阴性、氧化酶阳性葡萄糖发酵或不发酵菌
24~48h
NEG ID Type2 肠杆菌科、其它的发酵和非发酵菌 15~42h
Pos ID 革兰阳性球菌和李斯特菌属 18~48h
Rapid Anaerobe 厌氧菌 4h；需氧
Rapid HNID 奈瑟菌属、嗜血杆菌属、卡他莫拉菌、阴道加德纳菌 4h
Rapid NEG ID Type2 肠杆菌科、其他的发酵和非发酵菌 2h
Rapid NEG ID Type3 肠杆菌科、其他的发酵和非发酵菌 2.５h
Rapid Pos ID 革兰阳性球菌和李斯特菌属 2h
Rapid Yeast ID 酵母菌 4h

Micro-ID 肠杆菌科 4h
RapID ANAⅡ 厌氧菌 4~6h；需氧
RapID CB Plus 棒状杆菌 4h
RapID NF Plus 非发酵革兰阴性杆菌 4h
RapID NH 奈瑟菌、嗜血杆菌和其它革兰阴性细菌 4h；1h(淋球菌)
RapID onE 肠杆菌科和其它氧化酶阴性菌 4h
RapID STR 链球菌 4h
RapID Yeast Plus 酵母菌和酵母菌样菌 4h

AN 厌氧菌 4~16h；需氧
GN Microplate 需氧革兰阴性杆菌 4~24h
GP Microplate 大多数革兰阳性球菌和杆菌 4~24h
YT 酵母菌 24~72h
Neisseria Enzyme test 奈瑟菌属、莫拉菌属 30min
r/b Enteric Differential System 肠杆菌科 18~24h
Uni-Yeast Tek 酵母菌 24h~6d
Uni-N/F-Tek 革兰阴性发酵或不发酵细菌 24~28h
Medical Specialties Inc. Fox Exera GNI 肠道和非肠道革兰阴性杆菌 18~24h
AccuMed International, Inc. Sensititre AP 80 肠杆菌科和非发酵革兰阴性杆菌 5~18h

二、自动化的微生物鉴定和药敏试验分析系统
自动化的微生物鉴定和药敏试验分析系统在临床微生物实验室的应用，为微生物检验工作者对病原菌的快速诊断和药敏试验提供了有力工具。鉴定系统的工作原理因不同的仪器和系统而异。不同的细菌对底物的反应不同是生化反应鉴定细菌的基础，而试验结果的准确度取决于鉴定系统配套培养基的制备方法、培养物浓度、孵育条件和结果判定等。大多鉴定系统采用细菌分解底物后反应液中pH的变化，色原性或荧光原性底物的酶解，测定挥发或不挥发酸，或识别是否生长等方法来分析鉴定细菌。各种微生物鉴定系统的反应基础见表6-4-4。
药敏试验分析系统的基本原理是将抗生素微量稀释在条孔或条板中，加入菌悬液孵育后放入仪器或在仪器中直接孵育，通过测定细菌生长的浊度，或测定培养基中荧光指示剂的强度或荧光原性物质的水解，观察细菌的生长情况。在含有抗生素的培养基中，浊度的增加提示细菌生长，根据判断标准解释敏感或耐药。

表 6-4-4 各种微生物鉴定系统的反应基础

系统源性需要培养分析阳性结果指示系统举例
酶谱分析
(通常2~4h) 不需要酶活性色原性／荧光性底物混合物被酶水解后产生颜色变化 MicroScan Rapid panels、IDS
pH为基础的反应
（通常15~24h）需要碳水化合物利用 pH指示颜色变化碳水化合物分解产酸，蛋白质或含氮化合物被水解产碱 API、Crystal、VITEK cards、 Micro Scan conventional panels
碳源利用需要有机物无色变为紫色 Biolog
挥发性和不挥发酸测定需要细胞脂肪酸气相色谱鉴定终末产物与已知图谱比较 MIDI
肉眼观察生长需要各种底物混浊生长酵母菌鉴定

半自动化细菌鉴定和/或药敏分析系统
1．VITEK-ATB半自动细菌鉴定和药敏分析系统
VITEK-ATB是生物-梅里埃公司产品，由计算机和读数器两部分组成，计算机程序包括ATB和API的鉴定数据库、ATB的药敏数据库、数据储存和分析系统及药敏专家系统。鉴定和药敏反应板在机外孵育后，一次性上机读取结果，由计算机进行分析和处理，并报告细菌鉴定和药敏结果。
2．AutoScan-4半自动细菌鉴定和药敏分析系统
AutoScan-4是由Dade MicroScan公司生产，由计算机和读数器两部分组成。鉴定和药敏反应板在机外孵育后，一次性上机，自动判读鉴定和药敏试验结果；亦可人工进行判读，将编码输入计算机，由计算机软件评定结果。有鉴定及鉴定药敏复合板两种测试卡。
3．BBLTM CrystalTM半自动细菌鉴定系统
BBLTM CrystalTM半自动细菌鉴定系统是BD公司产品，将传统的酶、底物生化呈色反应与先进的荧光增强显色技术结合以设计鉴定反应最佳组合。反应板在机外孵育后，上机自动判读鉴定结果。配套提供独立分装的鉴定用肉汤试管，确保无菌状态，使用方便。配套比浊仪可快速调配所需浊度的菌液
4．AutoReader半自动细菌鉴定和药敏分析系统
AutoReader半自动细菌鉴定和药敏分析系统是Trek Diagnostic Systems LTD.产品，由计算机和读数仪等组成。采用荧光测定法，反应板在机外作定时孵育后，上机读数，由SAMS软件评定测定结果，也可通过SAMS系统人工确认法输入计算，或完全由人工输入作评定。所用鉴定板和药敏板与全自动机型中的反应板是一样的。
5．抑菌圈直径测量仪
抑菌圈直径测量仪有BIOMIC（Giles Scientific Inc），AccuZone System (AccuMed International Inc) ，SIRSCAN (SIRSCAN) 等三种单板读取机，已在临床应用。经孵育后的药敏平板，被仪器的图象分析系统识别并计算抑菌圈直径。根据判断标准，报告药敏试验结果。这些仪器可减少人工测量抑菌圈直径大小差异及主观判断错误。BIOMIC系统宣称能根据抑菌圈大小来计算MIC，值得注意的是该类仪器对抑菌圈内模糊生长或微小的菌落不能正确识别，而这些菌落对细菌的耐药性的判定至关重要，读取每个平板时必须进行人工观察。

（二）全自动的微生物鉴定和药敏试验分析系统
1．VITEK 系统
VITEK AMS是由生物-梅里埃公司生产的全自动微生物鉴定和药敏分析系统。第一代产品有以下四个规格VITEK AMS 32、60、120、240。由计算机主机、孵育箱/读取器、充填机/封口机、打印机等组成。鉴定原理是根据不同微生物的理化性质不同，采用光电比色法，测定微生物分解底物导致pH改变而产生的不同颜色，来判断反应的结果。在每张卡上有30项生化反应。由计算机控制的读数器，每隔1h对各反应孔底物进行光扫描，并读数一次，动态观察反应变化。一旦鉴定卡内的终点指示孔到临界值，则指示此卡已完成。系统最后一次读数后，将所得的生物数码与菌种数据库标准菌的生物模型相比较，得到相似系统鉴定值，并自动打印出实验报告。

获得细菌的纯培养后，调整菌悬液浓度，根据不同的细菌选择相应的药敏试验卡片，在充液仓中对卡片进行充液。置孵育箱／读数器中孵育，自动定时测试、读取数据和判断结果。VITEK可快速鉴定包括各种肠杆菌科细菌、非发酵细菌、苛氧菌、革兰阳性球菌、革兰阴性球菌、厌氧菌和酵母菌等500种临床病原菌。具有20多种药敏测试卡、97种抗生素和测定超广谱β-内酰胺酶测试卡，快速检测细菌药敏情况。

该系统有根据细菌耐药规律而设定的专家系统，可帮助校正和修改结果。对于专家系统提示的不可能的或极少见的耐药表型应予以充分重视，需采用确认试验重新鉴定。如对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌，对泰能耐药的肠杆菌，对青霉素耐药的β溶血性链球菌等。

VITEK-2是生物-梅里埃公司开发的新一代微生物分析仪，其工作原理与VITEK AMS没有大的差别，但它的容量更大，自动化程度更高，并且使用64孔的反应卡片，鉴定更准确可靠，可同时测定20种抗生素的药敏试验。

2. MicroScan Walk/ Away系统
MicroScan Walk/ Away系统由主机、真空加样器、孵育箱/读取器、计算机、打印机等组成。除采用传统呈色反应法外，同时采用敏感度极高的快速荧光测定技术来检测细菌胞外酶，鉴定板有普通板和快速板两种，普通板获得结果需要16~18h，快速板测定只需2~3.5h。该系统有8种鉴定反应板，可鉴定包括革兰阴性菌、革兰阳性菌、厌氧菌、酵母菌、嗜血杆菌和奈瑟菌等近800种细菌。药敏部分采用比浊法进行测定，90％菌株可在5.5h内获得对17~33种抗菌药物的MIC值。此系统有walk / Away－40和96两个型号，40或96分别代表该系统可同时容纳40或96个测试板。

3．PHOENIXTM 系统
PHOENIXTM System是新一代全自动快速细菌鉴定/药敏系统，由BD公司生产。鉴定试验采用BDZL荧光增强技术与传统酶、底物生化呈色反应相结合的原理。药敏试验采用传统比浊法和BDZL呈色（Chromogenic）反应双重标准进行药敏试验结果判断。仪器由主机、比浊仪、微生物专家系统等组成。有PHOENIXTM 100或50 二种型号。PHOENIXTM 100型分别可进行100个鉴定试验和100个药敏试验。可鉴定革兰氏阳性菌139种、革兰氏阴性菌158种。有鉴定板、药敏板或鉴定/药敏复合板3种可供选择。每个鉴定药敏复合板有51孔用于鉴定试验，85孔用于药敏试验，可同时进行17种抗菌素5种浓度或28种抗菌素3种浓度的MIC药敏试验。90%细菌的鉴定在3~6h完成，鉴定准确率大于90%，85%的细菌药敏试验在4~6h内出结果。

4．SENSITITRE　ARIS系统
该系统由计算机主机、孵育箱/读数仪、全自动加样器等组成。在培养箱中设置可存放64块板的转盘，每块板均能检测3个标本，故同时可检测192个菌种标本。在测定板底物中加入酶基质，使其与细菌产生的酶结合成荧光物质。在较短时间内能够分析不同生化底物所反映出的荧光物质，通过荧光读数仪检测板孔中荧光Biocide和Willcox值来鉴定细菌。该系统的药敏试验有两种测定法，即当采用人工判定时为比浊法，当采用仪器自动判读时为荧光测定法。但均参照NCCLS的标准和规则来解释结果。大多数菌种均可在5小时内报告检验结果。通常有革兰阴性菌、革兰阳性菌、厌氧菌、苛氧菌及真菌鉴定板和300多种抗菌药物不同组合的药敏板及鉴定/药敏复合板。

(三)使用自动化鉴定仪的局限性
1．自动化鉴定系统是根据数据库中所提供的背景资料鉴定细菌，数据库资料的不完整将直接影响鉴定的准确性。目前为止，尚无一个鉴定系统能包括所有的细菌鉴定资料。对细菌的分类是根据传统的分类方法，因此鉴定也以传统的手工鉴定方法为“金标准”。使用自动化鉴定仪的实验室，应对技术人员进行手工鉴定基础与操作技能培训。
2．细菌的分类系统随着人们对细菌本质认识的加深而不断演变，使用自动化鉴定仪的实验室应经常与生产厂家联系，及时更新数据库。实验室技术人员应了解细菌分类的最新变化，便于在系统更新之前即可进行手工修改。
3．通过自动化鉴定仪得出的结果，必须与其它已获得的生物性状（如标本来源、菌落特征及其它的生理生化特征）进行核对，以避免错误的鉴定。

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周锦帆