免疫荧光技术荧光抗体染色方法介绍--间接法
间接法是根据抗球蛋白试验的原理,用荧光素标记抗球蛋白抗体(简称标记抗抗体)的方法(图）。
间接法的检测过程分为两步:
第一步,用未知未标记的抗体(待检标本)加到已知抗原标本上,在湿盒中在37℃下保温30min,使抗原抗体充分结合,然后洗涤,除去未结合的抗体;第二步,加上荧光标记的抗球蛋白抗体或抗IgG、IgM抗体。
如果第一步发生了抗原抗体反应,标记的抗球蛋白抗体就会和已结合抗原的抗体进一步结合,从而可鉴定未知抗体。由于结合在抗原-抗体复合物上的荧光素抗体增多,发出的荧光亮度强,因而其敏感性强。
此外,它只需制备一种荧光抗体就可以检出多种抗原,能用于检测多种动物的多种抗原-抗体系统,而且能解决一些不易制备动物免疫血清的病原体(如麻疹)等的研究和检查。
此方法的缺点是易产生非特异性荧光,影响结果判断。
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