载脂蛋白E测试的实验方法介绍
①人血清VLDL的分离；取血清3.0ml，加入固体NaBr使其密度增加至1.30g/ml。在BeckmanL8-80离心机Ti80转头离心管中依次加入密度为1.00g/ml,1.20g/ml的NaBr溶液和1.30g/ml的血清样品，形成1.00～1.30g/ml的不连续密度梯度。10℃，70000r/min超速离心2h，离心后在管顶层可见白色乳状液体，此即为VLDL，小心收集0.3～0.5ml并转移至已准备好的脱脂管内脱脂。②VLDL的脱脂：按Scanu(1971)法进行。先用3：1（V/V）乙醇/乙醚混合液在-20℃脱脂两次，每次9～12h，继用乙醚脱脂1次，2h。每次脱脂后在-15℃离心收集沉淀，3000r/min,15min。末次离心后在管中加入0.01mol/L Tris-HCl,pH8.2，内含1%SDS，2%两性电解质载体，5%β-巯基乙醇及13%蔗糖的溶液60μl，并在室温下孵育30min，最后用氮气吹尽残存的乙醚，此即为IEF电泳的样品。③IEF电泳：按Menzel等（1983）法进行。垂直板PAG浓度为7.5%，内含1.6%pH4.0～6.5的两性电解质载体。电泳凝胶用0.2%CBBG250染色。脱色后至图像清晰后照像扫描。④ApoE表型判定：根据电泳图谱，依据E2、E3、E4各区带光密度比例确认ApoE各表型，如图1和表所示。ApoE表型的鉴定
表型
IEF凝胶电泳区带吸光度
E4/4
E4（+），E4>>E3，E2
E3/3
E4（-），E2/E3<1
E2/2
E4（-），E2/E3>1
E4/3
E4（+），E2/E3<1
E4/2
E4（+），E2/E3>1
E3/2
E4（-），E2/E3>1
由于ApoE即有主要异构体，又有次要异构体，有时使表型确定较为困难。一般情况下，应用此法较易确定ApoE纯合子表型，但对于某些杂合子表型的判定要慎重，往往要在色带经过光密度扫描以后，根据两条色带颜色深浅之比才能最后定论。如仍难以确定时，可用唾液酸酶处理VLDL，使次要异构体减少或消失，而有利于表型的判定。
