酪氨酸与N-乙酰-L色氨酸照高效液相色谱法(通则0512)测定供试品溶液精密量取本品2ml,置25ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。对照品溶液取酪氨酸对照品约29mg及N-乙酰L色氨酸对照品约130mg,精密称定,置同一250ml量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀。精密量取2ml,置25ml量瓶中,用流动相稀释至刻度,摇匀。冷至室温的基准氯化钠1.592g、3.223g,各加水使溶解并稀释至色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以甲醇-0.008mol/L的磷酸二氢钾溶液(10:90)为流动相;检测波长为280nm;进样体积20l系统适用性要求理论板数按N-乙酰-L色氨酸峰计算不低于2000,各峰间的分离度应符合要求。测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按外标法以峰面积计算。其他氨基酸采用适宜的氨基酸分析法或照高效液相色谱法(通则0512)测定。内标溶液取正亮氨酸适量,加水溶解并定量稀释制成每1ml中约含0.8mg的溶液,摇匀。供试品溶液精密量取本品5ml,置50ml量瓶中,用水稀释至刻度,摇匀;精密量取5ml,置10ml量瓶中,精密加人内标溶液2ml,用水稀释至刻度,摇匀。对照品溶液取异亮氨酸对照品约50mg、亮氨酸对照品约100mg、醋酸赖氨酸对照品约100mg、甲硫氨酸对照品约30mg、苯丙氨酸对照品约80mg、苏氨酸对照品约55mg、缬氨酸对照品约40mg、丙氨酸对照品约55mg、精氨酸对照品约0mg、门冬氨酸对照品约35mg、谷氨酸对照品约55mg、组氨酸对照品约50mg、脯氨酸对照品约30mg、丝氨酸对照品约20mg、甘氨酸对照品约90mg,精密称定,置同一250ml量瓶中,加水适量使溶解,用水稀释至刻度,摇匀;精密量取5ml,置10ml量瓶中,精密加人内标溶液2ml,用水稀释至刻度,摇匀。色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.1mo/L醋酸钠溶液(用稀醋酸调节pH值至6.5)-乙腈(93:7)为流动相A,以乙腈-水(80:20)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为254mm;进样体积2l时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)0.0113.929.0 07253o 32.0系统适用性要求各氨基酸峰的理论板数均应大于2000,各峰间的分离度应符合要求。测定法精密量取供试品溶液和对照品溶液各2ml,分别置20ml具塞试管中,精密加人1mol/L三乙胺-乙腈(14:86)溶液1ml,0.lmol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液1m,摇匀,在50℃水浴中反应45分钟,取出,放冷,再分别精密加入正己烷lml,摇匀,放置30分钟后(溶液至澄清),取澄清的下层液,分别注入液相色谱仪,记录色谱图。按内标法以峰面积计算。 葡萄糖精密量取本品10m,置于阳离子交换柱内(交换柱内径为10mm,高为22cm,内填经转型并处理至中性的钠型磺酸盐阳离子交换树脂约10g),以每分钟0.5~0.7ml的流速通过柱,收集流出液于50ml量瓶中,再用水洗柱3次,每次10ml,洗液与流出液合并,并用水稀释至刻度,摇匀。依法测定旋光度(通则0621),与10.426相乘,即得100ml供试品中C6H12O6·H2O的含量(g)。