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核酸的定量测定实验中所用到的公式和计算过程

2023.9.08

定磷法是一经典的但至今仍被经常采用的方法,它具有灵敏、简便的特点。各种含磷有机物经硫酸或过氯酸水解,使有机磷消化成为无机磷。无机磷在酸性条件下,与钼酸盐(常用钼酸铵或钼酸钠)反应生成磷钼酸盐络合物。用还原剂处理,磷钼酸盐络合物被还原生成钼蓝,在660nm处有最大光吸收峰。在一定浓度范围内,颜色的深浅与磷含量成正比关系。因此可应用分光光度法进行磷的定量测定。化学反应式:(NH4)2MoO4 + H2SO4 → H2MoO4 + (NH4)2SO4H3PO4 + 12H2MoO4 → H3P (Mo3O10)4 + 12H2O还原剂H3P (Mo3O10)4 → Mo2O3 MoO3核酸是一类含磷化合物,其分子含有一定比例的磷,一般纯的RNA及其核苷酸含磷质量分数为9.0%;DNA及其核苷酸含磷质量分数为9.2%,即每100g核酸含有9.0~9.2g磷,也就是核酸量是含磷量的11倍左右,故测得磷的量,即可求得核酸量。这就是定磷法的理论依据,磷的定量测定是测定核酸含量常用手段之一

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