分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

线粒体电镜照片观察实验

2019.9.17

实验方法原理	线粒体同内质网一样，除原核细胞和哺乳动物成熟的红细胞外，其他所有细期线粒体(mitochodri)。一个细胞中线粒体的数目、形状和大小常因细胞和生理状况等不同而有较大的差别，如某种海藻中只有一个线粒体，玉米根品中有100~3000 个，而海胆卵母细胞中线粒体多达30 万个;在光学显微镇粒体呈线状、颗粒状、杆状等，故称线粒体; 大小一般直径为0.5~1.0μm。电镜下可见线粒体外包被双层封闭的单位膜，内含有主要由蛋白质组成的质(stroma,mati),内、外膜并不相连，它们之间相间40~80A 。
实验材料	兔子
试剂、试剂盒	詹纳斯绿B染液 Ringer氏液
仪器、耗材	显微镜载玻片盖玻片
实验步骤	一、线粒体的光镜切片观察 1. 用詹纳斯绿B染色的兔肝细胞光镜切片，肝细胞中的线粒体呈蓝绿色的颗粒。二、线粒体的电镜照片观察 1. 不同细胞中线粒体的形态和数目不同。线粒体的外形多样，如圆形、椭圆形、哑铃形和杆状。线粒体的数目与细胞类型和细胞的生理状态有关，线粒体多聚集在细胞生理功能旺盛的区域。 2. 线粒体脊的数目与分布方式是多种多样的。一般与线粒体长轴垂直排列，但也可见到与线粒体长轴平行排列的脊。脊的横切面呈囊状或管状。脊的数量与细胞呼吸机能的强度有很大关系。 3. 这有三张线粒体超薄切片的电镜照片：（1）第一张是小鼠肾小管上皮细胞中线粒体的电镜照片，可见线粒体呈椭圆形和杆状，由双层膜包围，内膜向内突起成平板状脊，脊与线粒体长轴垂直排列，肾小管上皮细胞重吸收作用需要能量，线粒体数目多。（2）第二张是恒河猴脊髓突触内线粒体。可见线粒体体积小、数目多，脊与线粒体呈同心圆排列。（3）第三张是小鼠睾丸间质细胞线粒体，线粒体的脊为分支的管，在照片上呈单层膜泡状展开
注意事项	在使用透视电子显微镜观察生物样品前样品必须被预先处理。随不同研究要求的需要科学家使用不同的处理方法。固定：为了尽量保存样本的原样使用戊二醛来硬化样本和使用锇酸来染色脂肪。冷固定：将样本放在液态的乙烷中速冻，这样水不会结晶，而形成非晶体的冰。这样保存的样品损坏比较小，但图像的对比度非常低。脱干：使用乙醇和丙酮来取代水。垫入：样本被垫入后可以分割。分割：将样本使用金刚石刃切成薄片。染色：重的原子如铅或铀比轻的原子散射电子的能力高，因此可被用来提高对比度。展开
其他	分辨能力是电子显微镜的重要指标，电子显微镜的分辨能力以它所能分辨的相邻两点的最小间距来表示，即称为该仪器的最高点分辨率：d=δ。显然，分辨率越高，即d的数值（为长度单位）愈小，则仪器所能分清被观察物体的细节也就愈多愈丰富，也就是说这台仪器的分辨能力或分辨本领越强。