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氨基酸的薄层层析实验原理

2018.3.16

  聚酰胺薄膜层析是60年代以后发展起来的一种新的层析方法,特别适用于氨基酸及其衍生物的分析。具有灵敏度高、分辨率强、操作方便快捷等特点。

  聚酰胺是一类化学纤维素原料,即锦纶(尼龙)。由乙二酸和乙二胺聚合而成的,称锦纶66。

  由于分子中含有大量的酰胺基团,故称聚酰胺。聚酰胺薄膜是在涤纶片基上涂上一层锦纶制成的。聚酰胺对许多极性物质有吸附作用,这是由于聚酰胺的-C=O和-NH -能与被分离物质的一定基团形成H键。如酚类(黄酮类、鞣质)和酸类(氨基酸、核苷酸)能以其羟基与酰胺键的羰基形成H键。在层析过程中,当样品随流动相通过聚酰胺薄膜时,由于聚酰胺与各极性分子产生H键吸附能力的强弱不同,从而可将样品中各成分分离。

  物质分离后,层析点在图谱上的位置,即在滤纸上的移动速率,用Rf来表示。

  在一定条件下,每个物质都有特定的Rf值,因此,用Rf可鉴定不同的物质。

  无色物质的层析图谱可用光谱法(紫外照射)或显色法鉴定。氨基酸层析图谱常用茚三酮作显色剂。本实验利用单向上行层析法鉴定氨基酸。

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