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手动进样真有你想象的那么简单？

2019.9.21

　　目前很多制药企业都主要以自动进样为主，只有学校和一些中小型的第一方实验室使用手动进样。部分实验用的就是手动进样。关于造成实验数据重复性差原因一般是：1进样量不合适; 2所用进样针刻度不准;3进样针里有起泡;4进样口松动，针插不紧;5进样针太细，插不紧;6转子密封垫脏、磨损或漏液;7进样方法不正确。可以自己对照逐个排除。那么如何将这些原因一一排除呢？

　　进样量的把握

　　以20ul原配样品环为例，部分注入样品进样体积在5-15ul重现性好，建议10ul。全部注入样品进样体积以20*4，即80ul重现性好，就是要达到样品环体积4倍以上。

　　手动进样步骤：

　　1吸样后擦针、排气泡;2进样状态(inject)下插针到底部;3快速切到装填(load)状态;4较快匀速推针杆，注入样品;5快速切回inject;6拔针。步骤要牢记，速度要把握好，熟练才是最好的。

　　使用及保养事宜

　　1、手柄处于Load和Inject之间时，由于暂时堵住了流路，流路中压力骤增。再转到进样位，过高的压力冲击在柱头上会造成损坏，所以应尽快转动阀，不能停留在中途。

　　2、注射器针头有别于气相色谱，是平头注射器。平针头的优点：A：针头外侧紧贴密封垫内侧，密封性能好，不漏液，不引入空气。B：防止针头刺坏密封垫及划伤定子。应该注意选择质量好的液相色谱专用注射器。

　　3、装液量有部分装液法和完全装液法两种。A：部分装液法进样时，进样量最多为定量环体积的75%。B：完全装液法进样时，进样量最少为定量环体积的3至5倍。这样才能完全置换定量环内残留的溶液。

　　4、可根据进样体积的需要选择定量环，一般不要求精确计算定量环的体积。譬如，一根名义上10uL的定量环，实际是9uL还是11uL并不重要，因为被测样品和校正样品的进样体积保持一致，在计算结果时误差都被抵消了。

　　5、样品溶液均要用滤膜过滤。防止微粒阻塞进样阀和减少对进样阀的磨损。

　　6、每天使用后应冲洗进样器，通常用适当的有机溶剂、水或不含盐的流动相冲洗，在进样阀的Load和Inject位置反复冲洗。

　　7、注意擦拭注射器针头的外侧。防止交叉污染。

　　气相手动进样之技巧

　　1、进样速度要快。取样后，一手持注射器，另一手保护针尖(防止插入时弯曲)，小心地将针头穿过隔垫，随即以最快的速度将注射器插到底，同时迅速将供试品注射入汽化室，然后快速拔出注射器。

　　2、取样量要准确。

　　3、为避免供试品之间的相互干扰。取样前先用供试品溶剂洗针至少3次(抽满针管的2/3，再排出)，再用要分析的供试品洗针至少3次。

　　4、选用合适的注射器。GC分析最常用的是10μl微量注射器，其进样量一般不要小于1μl。进样量要控制在1μl以下，就应采用5μl或1μl的注射器，由于此类注射器往往是将供试品抽在针尖内，取样时应反复推拉针芯，以确保针尖内没有气泡。

　　5、微量注射器用后必须用甲醇等有机溶剂清洗干净

　　扎针时感觉进样垫较紧,则注样后拔针可快;若扎针时感觉进样垫较松,则注样后拔针可慢点。尖头注射器进样如果遇到有坚硬阻力,切莫拔针;而是将注射器向左或右旋转下继续扎针。尖头注射器如果被硅胶未堵住针尖,则可将针杆拔出,再重新将针杆放入注射器孔内,利用空气的压缩性快速将硅胶未排出针尖;如果还不行,则将针尖扎到高温汽化室内,针尖高温下再排空,一般可用空气挤出针尖硅胶未。以上二方法还不能见效,则可用酒精灯或打火机烧红你的针尖,再排空。

　　HPLC手动进样器的清洗

　　手动进样阀的清洗，一般来说目的就是为了消除交叉污染或样品的残留产生鬼峰从而造成进样重复性变差等问题。一般来说我们采用的进样方式都为在inj状态下进针，然后转换到load状态进样，然后转换到inj状态，然后拔针。这种进样方式样品的主要残留在自进样口到转子密封这一段。冲洗方式为：采用阀自带的针孔清洁器用不含盐的流动相，在load和inj两种状态反复冲洗冲洗目的不是为了冲洗定量环，而是为了冲洗自进样口至转子密封这一段，和废液管。

　　固定的冲洗可以冲掉进样口粘附的样品及可能的盐，样品残留可能影响第二针的测定结果，盐残留可能磨损定子和转子之间的光滑面。具体先后吸超纯水和色谱纯甲醇冲洗。一般在关闭仪器后再清洗，因为有些六通阀带有触发开关，你在扳动六通阀的时候，梯度程序会自动启动。还有在进一针高浓度的样品后一般要冲洗。

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