材料和试剂
1. 蛋白酶K（罗氏03115836001）
2. 1M的Tris，pH值8.3
3. 氯化钾
4. 吐温20（10％，EMD4 biosciences，655207）
5. NP40（10％，Merck，492018）
设备
1. PCR仪
2. 离心机
3. 孵化器
步骤
1. 冷冻单活胚胎
1) E3洗涤dechorionated胚胎3X。
2) 将一个单个的胚胎放入一个96孔板，并移除所有多余的缓冲液。
（如果需要，干燥保存于-20°C）。
2. DNA的制备：
1) 添加50μl裂解液到单个的胚胎（活体或在situ'd）。
2) 在98 °C孵育10分钟裂解细胞。自旋向下。
3) 加入5μl蛋白酶K（10 mg / ml的储存液）到单个的胚胎。
4) 在55 °C孵育至少2个小时（长与孵育期，清除DNA）
5) 在98 °C孵育至热灭活蛋白酶K
6) 涡旋彻底和自旋出现碎片。
7) 单个胚胎的DNA 每次PCR rxn使用2μl。
配方
1. 1X PCR缓冲液：
配制50 ml：
10 mM的Tris - HCl pH值8.3（500μl 1M的Tris（pH值8.3）
50 mM氯化钾（2.5 ml的1 M氯化钾）
无菌水47 ml
（可在室温下保存几个月）
2. 胚胎细胞裂解液：（含有吐温20和NP40的1X PCR缓冲液）
配制10 ml裂解缓冲液中：
1X PCR缓冲液9.4 ml
300μlNP40（10％的储存液）***现用
300μl tween20（10％的储存液），现配***
3. E3
60X E3的股票（2L）
34.4克氯化钠
1.52克氯化钾
5.8克CaCl2.2H2O
9.8克MgSO4.7H2O
加蒸馏水至2000 ml
储存在室温下。
饲养斑马鱼时稀释成1X，使用160 ml的储存液，并填加ddH2O至10L。 (责任编辑：大汉昆仑王) | 
