豚鼠白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫分析
豚鼠白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫分析
试剂盒使用说明书
本试剂盒仅供研究使用。
豚鼠白细胞介素-6（IL-6）酶联免疫分析检测范围：
96T
3pg/ml-120pg/ml
使用目的：
本试剂盒用于测定豚鼠血清、血浆及相关液体样本中白细胞介素-6（IL-6）含量。
实验原理：
本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中豚鼠白细胞介素-6（IL-6）水平。用纯化的豚鼠白细胞介素-6（IL-6）抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入白细胞介素-6（IL-6），再与 HRP标记的白细胞介素-6（IL-6）抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在 HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的白细胞介素-6（IL-6）呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长下测定吸光度（OD 值），通过标准曲线计算样品中豚鼠白细胞介素-6（IL-6）浓度。
标本要求：
1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融。
2．不能检测含NaN3的样品，因 NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤：
标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
120pg/ml
60pg/ml
30pg/ml
15pg/ml
7.5pg/ml
5号标准品
4号标准品
3号标准品
2号标准品
1号标准品
150μl的原倍标准品加入 150μl标准品稀释液
150μl的 5号标准品加入 150μl标准品稀释液
150μl的 4号标准品加入 150μl标准品稀释液
150μl的 3号标准品加入 150μl标准品稀释液
150μl的 2号标准品加入 150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50μl，待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，
然后再加待测样品 10μl（样品最终稀释度为 5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置 37℃温育30分钟。
4.配液：将 30倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30倍稀释后备用
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30秒后弃去，如此重复 5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同 3。
8.洗涤：操作同 5。
9.显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。
10.终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值）。测定应在加终止液后 15分钟以内进行。
操作程序总结：
计算
以标准物的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与 OD值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的 OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。
