猪肺泡巨噬细胞的培养操作规程！

　　猪肺泡巨噬细胞的培养操作规程！

　　一、细胞简介

　　平台编号：bio-105900

　　规格：1ml/T75

　　拉丁属名：3D4/21

　　产品名称：3D4/21（猪肺泡巨噬细胞）

　　型号：HTX2097

　　生长特性：贴壁

　　组织来源：猪肺泡巨噬细胞

　　培养基：89%DMEM+10%FBS+1%双抗

　　培养温度：37℃

　　种属：其它细胞系/仓鼠、猴、猪、狗、鸡、鸭等

　　到货周期：10-15个工作日

　　二、3D4/21（猪肺泡巨噬细胞）介绍

　　母细胞3D4来源于pSV3neo质粒转染猪原代肺泡巨噬细胞得到的。该克隆通过G418筛选得到。

　　三、3D4/21（猪肺泡巨噬细胞）特性

　　1）来源：猪肺

　　2）形态：巨噬细胞样，贴壁生长

　　3）含量：>1x10e6 个/mL

　　4）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　5）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　四、3D4/21（猪肺泡巨噬细胞）接受后的处理

　　1）收到细胞后，请检查是否漏液，如果漏液，请拍照片发给我们。

　　2）请先在显微镜下确认细胞生长状态，去掉封口膜并将T25瓶置于37℃培养约2-3h。

　　3）弃去T25瓶中的培养基，添加6ml本公司附带的完全培养基。

　　4）如果细胞长满（90%以上）请及时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。

　　5）接到细胞次日，请检查细胞是否污染，若发现污染或疑似污染，请及时与我们取得联系。

　　五、细胞用途：仅供科研使用。

　　本公司的细胞培养操作规程，供参考

　　一、培养基及培养冻存条件准备

　　1）准备RPMI-1640培养基（RPMI-1640，GIBCO，货号11875085），90%；添加0.1mM NEAA, 1mM丙酮酸钠；胎牛血清，10%。

　　2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

　　3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　二、细胞处理

　　1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：

　　1、弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

　　2、加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3ml此细胞的培养基终止消化。

　　3、轻轻吹打后吸出，移入15ml离心管中，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养液后吹匀。

　　4、移入到事先准备好的含有5ml培养基的T-25培养瓶中或含有14ml培养基的T-75培养瓶中培养。

　　3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。贴壁细胞冻存时，先要消化处理并进行细胞计数。消化方法按照细胞传代方法的1-3步骤进行，最后的重悬液使用血清。悬浮细胞直接计数后离心，用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X10e6个细胞冻存。

　　三、注意事项

　　1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

　　2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

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