一期梅毒的诊断主要根据接触史、潜伏期、典型临床表现，同时结合实验室检查（暗视野显微镜、镀银染色、吉姆萨染色或直接免疫荧光检查发现TP；梅毒血清试验早期阴性，后期阳性），应注意不可仅凭借一次梅毒血清学试验阴性结果排除梅毒。硬下疳应与生殖器疱疹、软下疳、白塞病和固定性药疹等进行鉴别：

　　1.生殖器疱疹

　　典型表现为生殖器部位簇集性小水疱，自觉痒痛，不硬，1～2周后可消退，但易复发，组织培养为单纯疱疹病毒，Tzank涂片检查阳性，PCR检测疱疹病毒DNA为阳性。

　　2.下疳样脓皮症

　　病原菌为金黄葡萄球菌或链球菌，皮损形态与硬下疳类似，但无典型软骨样硬度，周围无暗红色浸润，无不洁性交史，梅毒螺旋体检查阴性，附近淋巴结可肿大，但皮损愈后即消退。

　　3.软下疳

　　亦有性接触史，由杜克雷嗜血杆菌引起，潜伏期短，发病急，炎症显著，疼痛，性质柔软，皮损常多发，表面有脓性分泌物，可检见杜克雷嗜血杆菌，梅毒血清试验阴性。

　　4.结核性溃疡

　　亦多见于阴茎、龟头，皮损亦为单发孤立浅表性圆形溃疡，表面常有结痂，自觉症状轻微，可检见结核杆菌，常伴有内脏结核。

　　5.贝赫切特综合征

　　可在外阴部发生溃疡，女性亦可见于阴道、子宫颈，溃疡较深，有轻微瘙痒，损害无硬下疳特征，常继发口腔溃疡、眼损害（虹膜睫状体炎、前房积脓等）、小腿结节性红斑及游走性关节炎等，梅毒血清反应阴性。

　　7.固定性药疹

　　为药物性皮炎的一种，可见于外生殖器处，为鲜红色红斑，可形成浅表性糜烂，自觉痒、不痛、无硬下疳特征，有服药史，梅毒血清反应阴性。