胰岛素的鉴别方法

(1)在含量测定项下记录的色谱图中,供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。(2)照高效液相色谱法(通则0512)试验供试品溶液取本品适量,加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含10mg的溶液,取20l,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(pH7.3)20μ、0.1%V8酶溶液201与水140l,混匀,置37℃水浴中2小时后,加磷酸3l对照品溶液取胰岛素对照品适量,加0.1%三氟醋酸溶液溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液,取20l,加0.2mol/L三羟甲基氨基甲烷盐酸缓冲液(pH7.3)20μd、0.1%VB酶溶液20l与水140l,混匀,置37℃水浴中2小时后,加磷酸3dl色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(5~10μm);以0.2mol/L硫酸盐缓冲液(取无水硫酸钠28.4g,加水溶解后,加磷酸2.7ml,乙醇胺调节pH值至2.3,加水至1000ml)-乙腈(90:10)为流动相A,以乙腈-水(50:50)为流动相B,按下表进行梯度洗脱;柱温为40℃;检测波长为214nm;进样体积25μl时间(分钟)流动相A(%)流动相B(%)测定法精密量取供试品溶液与对照品溶液,分别注人液相色谱仪,记录色谱图。结果判定供试品溶液的肽图谱应与对照品溶液的肽图谱一致