毛细管柱气相色谱法测定中草药中8 种有机氯农药残留
有机氯农药是一类曾被世界广泛适用的广谱杀虫剂。其中六六六( HCH) 和滴滴涕(DDT) 使用时间长,用量大,范围广,虽已禁用多年,由于其脂溶性、半衰期长和难降解的特性,长期积存在环境中,尤其是在土壤中含量较高 ,进而迁移至植物、蔬菜,中草药中。近年来,回归自然的潮流使人们对绿色药品更为关注,世界各国对天然药物的需求日益扩大,但自上个世纪以来,中草药的农 药残留,特别是有机氯的残留已成为我国中草药走向国际市场的主要障碍,因此,使我国中草药有机氯农药的研究标准化、规范化具有十分重要的意义。我国已经制 定了果蔬、食品及油脂中HCH 和DDT 的国标检测方法和限量标准,而中草药农药残留的国标检测方法和限量标准还很少。本研究通过对人参、丹参、甘草桔梗等植根类中药有机氯测定,建立了毛细管柱气相色谱法测定4 种中草药中8 种有机氯农药残留方法,为中草药中农药残留检测提供有效的分析方法。
1 实验部分
1. 1 主要仪器与试剂 GC - 6820 气相色谱仪配ECD 检测器,DB - 5 石英毛细管柱(30. 00m ×0. 32mm ×0. 25m) 。DDT 和HCH 标准品;取DDT 和HCH 混合标准品(含4 种滴滴涕异构体及4 种六六六异构体) ,先用正己烷溶解配成100μg/ L 的储备液,临用时再用正己烷逐步稀释,配制成标准工作液。丙酮、石油醚及正己烷均为色谱纯,无水硫酸钠(650 ℃灼烧5h) ,氯化钠(120 ℃烘4h) ,氟罗里硅土(120 ℃烘4h) ,固体试剂冷却后均于干燥器中保存。测土仪，（测量土壤中养分的含量，如氮、磷，这些也是农残残留的一方面）。土壤温湿度记录仪。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 样品预处理 准确称取已充分粉碎的样品5g 于250ml 三角烧瓶中,加入萃取剂100ml (正己烷40ml + 石油醚40ml + 丙酮20ml ) , 浸泡4h , 在摇床中震摇1h , 超声提取30min ,经玻璃砂芯漏斗过滤,静置分层。转移上层有机相,并使其通过250px 高无水硫酸钠玻璃小柱,并用正己烷少量多次润洗,80 ℃水浴蒸发至2ml ,待净化。
1. 2. 2 样品的净化 在玻璃层析柱中加入50px 高的无水硫酸钠,8g 氟罗里硅土,再加入50px 高的无水硫酸钠,敲实。取20ml 正己烷倒入层析柱中润湿吸附柱, 待正己烷接近上层无水Na2 SO4 时,将浓缩液转移至层析柱中, 并用正己烷洗涤浓缩瓶3 次,洗涤液并入层析柱中,收集净化液, 待浓缩液接近上层无水硫酸钠时, 以正己烷∶丙酮( 9 ∶1) 淋洗层析柱,并入浓缩瓶中80 ℃水浴蒸发近干,用正己烷定容至1ml ,供气相色谱分析。
1. 2. 3 色谱条件 进样口温度250 ℃, 电子捕获检测器温度300 ℃,载气、辅助气均为高纯氮气,纯度99. 999 % ,载气流速:2. 0ml/ min ,进样方式:不分流进样,色谱柱升温程序:柱温150 ℃维持4min ,再由8 ℃/ min 升至220 ℃,保持12min ,再由20 ℃/ min 升至270 ℃,保持5min。进样量1μl 。
2 结果
2. 1 线性范围与检出限 用正己烷将100μg/ ml 的储备液分别稀释成不同质量浓度的标准溶液进行实验,并绘制标准曲线,试验结果表明,被测组分质量浓度在0. 01～5. 00μg/ ml的范围内与其色谱峰面积呈线性关系。HCH 和DDT 8 种组分的线性回归方程、相关系数及方法检出限(S/ N = 3) 见表1
2. 2 方法加标回收率及精密度 在优化后的色谱条件下进行日内和日间精密度试验。分别取低、中、高三种浓度的标准液,每种浓度在1d 中测试6 次,得日内精密度(RSD) 在3. 1 %
～5. 4 %之间,同样3 种浓度内日测试1 次,连续测试6d ,得日间精密度在4. 5 %～9. 6 %之间。平行取7 份相同中草药样品(桔梗) 分别加入二种浓度的混标溶液,由于中草药中有机氯的含量较低,因此选低中二个浓度进行加标回收试验, ,然后按试验方法进行提取、净化及气相色谱测定( n = 7) ,结果见表2 。
2. 3 样品的测定 准确称取4 种中草药,按“1. 2”项处理,以外标法定量,测得农药残留结果见表3 ,8 种有机氯标准及样品色谱图见图1 。
3 结论
本文建立了4 种植根类中草药中8 种有机氯农药残留的气相色谱测定方法,方法操作简便,准确度高。从测定结果看,8 种有机氯农药残留在这四种草药中均有检出。其中β- HCH 含量最高,P , P′- DDD 最低,参考2000 版药典中对黄芪甘草项下对HCHs 和DDTs 的限量标准 ,检测的4 种中草药样品有机氯残留均未超标。
