标准菌验收、制备、保藏、 传代、使用、销毁的管理（二）
菌种的传代保藏过程
3.3项下标准菌的复苏为传第一代，复壮为第二代。 传第三代时取1支冻存管自然解冻，将其转接斜面菌种作为工作用菌种。此时，工作用菌种为第3代。工作用菌种，分为两类：一类用于定期传代(W3)，一类用于实验用（S3）。
定期传代用菌的传代其操作步骤如下（斜面接种法）：
（1）从冰箱冷藏室中取出菌种斜面后，应在室温放置约30分钟。
（2）将装有新鲜配制的培养基菌种保藏管管壁上注明菌名及接种日期，和传代菌种一并移入洁净工作台，打开紫外灯照射一小时。
（3）关闭紫外灯。点燃酒精灯，左手握住菌种斜面，将管口靠近火焰上方，右手拿接种棒后端，将接种环烧红约30秒，随后将接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过三次。
（4）右手用无名指、小指及掌部夹住管塞，左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手再轻轻拔开管塞，将接种环伸入管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷后再至菌苔上，刮取少量菌苔，随即取出接种棒并将菌种管口移至火焰上方。
（5）塞上管塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面（或改良马丁琼脂斜面）一支，照上述操作打开管塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的底部向上划一条直线，然后从底部向上作连续曲线划线，一直划到斜面顶端，使细菌接种在斜面的表面上。
（6）取出接种环，在火焰上方将培养基管盖上塞子，然后将接种过细菌的接种环在火焰上烧灼灭菌。
（7）将已接种好的细菌管置30～35℃细菌培养箱培养22 ～24h，真菌管置23～28℃真菌培养箱最多培养7天。
当工作用菌种传代代数小于5时，可直接用上一代工作用菌种转接下一代工作用菌种，如：（W3）可直接转接为（W4）。按上述程序操作，直至（W4）转为（W5）为止，需重新接种，旧的工作菌种进行销毁。
菌种斜面的培养、保藏条件及时间
菌种 培养条件及时间 培养基 保存条件及时间
大肠埃希菌(CMCC(B)44102) 30～35℃22～ 24h 营养琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
金黄色葡萄球菌(CMCC(B)26003) 30～35℃22～ 24h 营养琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
枯草芽孢杆菌(CMCC(B)63501) 30～35℃22～ 24h 营养琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
铜绿假单胞菌(CMCC(B)10104) 30～35℃22～ 24h 营养琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
乙型副伤寒沙门菌(CMCC(B)50094) 30～35℃22～ 24h 营养琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
生孢梭菌(CMCC(B)64941) 30～35℃22～ 24h 营养琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
白色念珠菌(CMCC(F)98001) 23～28℃ 最多7天 改良马丁琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
黑曲霉(CMCC(F)98003) 23～28℃ 最多7天 改良马丁琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
短小芽孢杆菌(CMCC(B)63602) 30～35℃22～ 24h 营养琼脂培养基 2℃～ 8 ℃保存3个月
注：菌种斜面1次/周观察状态是否正常。
3.7菌种的使用及销毁
每次进行菌种复活时，只能复活一个菌种。如果要复活其他菌时，应对所用物品重新消毒灭菌。
每次操作，都应进行记录。菌种管上应贴有牢固的标签。标明菌种名称、菌种代号、代次、传代人、编号和传代日期、贮存条件、有效期至等。
废弃菌种及实验用品废弃物的处理：121℃ 高压蒸汽灭菌30分钟。并对操作过程进行记录。
