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jaffe反应

2020.5.11

  目前肌酐检测方法主要有两种,苦味酸法和酶法,简单介绍如下

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  1. 碱性苦味酸法(Jaffe反应)

  1.1 测定原理

  肌酐有酮、烯醇式两种,在碱性介质中均以烯醇式肌酐形式存在,再与碱性苦味酸反应,产生一种红色的苦味酸肌酐复合 物,所形成的红色与肌酐浓度成正比,并可在波长500~ 520nm处测定。

  1.2 影响因素

  a、假肌酐

  此法的主要缺点是特异性不高,血中的维生素C、丙酮酸、丙酮、葡萄糖、乙酰乙酸、果糖、蛋白质、氨基马尿酸 及很多其他化合物亦能与碱性苦味酸生成红色,这些不是肌酐而能起红色反应的物质统称为假肌酐。

  对于这些假肌酐的干扰,应用2点速率法来测定,即读取起始吸光度(A i),再过120S读取终末吸光度 (Af),计算时用Af—Ai=ZXA,通过2点速率法,有效地降低这些假肌酐带来的结果偏高的影响,假肌酐浓度过高时,还是会产生影响。

  b、高浓度胆红素

  高胆红素对测定结果也有很大影响,往往使结果偏低,尤其新生儿血清中的高胆红素,常会出现结果负值。这是因为胆红素在波长510nm处也有较强光吸收,影响Jaffe反应生成的红色复合物。

  对于因高胆红素带来的负影响,一 般的苦味酸试剂中都加入了各种氧化物(包括过氧化物酶、 胆红素、氧化酶、高铁氰化钾等),使胆红素被氧化成胆绿 素,来降低其干扰。

  c 、溶血

  在红细胞、血清或血浆及尿液中假肌酐物质各约为60%、20%及50%,相当于大量的假肌酐存在于红细胞中,为避免结果的误差,血清样品应注意不能发生溶血。

  2. 酶法

  2.1 测定原理

  肌酐在肌酐酶的催化下水解生成的肌酸,在肌酸酶的催化下肌酸水解产生肌氨酸和尿素。然而,肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化生成甘氨酸、甲醛和双氧水;最后偶联Trinder反应,比色测定肌酐在肌酐酶的催化下水解生成的肌酸,在肌酸酶的催化下肌酸水解产生肌氨酸和尿素。然而,肌氨酸在肌氨酸氧化酶的催化下氧化生成甘氨酸、甲醛和双氧水;最后偶联Trinder反应,比色测定。

  2.1 影响因素

  a、内源性肌酸

  目前均通过在R1试剂中除去。

  b、胆红素

  通过在试剂中加入亚铁氰化钾除去胆红素干扰,但是浓度过高还是会有影响。

  c、抗坏血酸

  抗坏血酸主要影响Trinder反应(后期推送一期汇总Trinder反应的项目),目前通过在体系中加入抗坏血酸氧化酶消除抗坏血酸的干扰。同样高浓度抗坏血酸依然会影响酶法测定,尤其肌酐浓度较低时更加明显。

  d、药物

  酶法易受药物影响,如强苯磺酸钙、酚磺乙胺等,如果肌酐酶法测定结果明显与临床不符合时,可考虑患者用药情况,进一步查找原因。

  两种方法对比

  苦味酸法价格便宜,但是容易受到假肌酐影响,且该试剂可能容易污染管路;酶法虽然价格偏贵,但是线性范围宽,抗干扰能力强,不易受到假肌酐和内源性肌酸影响,是目前主流方法,但是易受药物干扰,改问题还需引起重视。

  参考文献

  屈引婷,王鸿. 两种不同方法检测血清肌酐结果的比较. 现代检验医学杂志,

  赖泽仁, 血清肌酐的酶法测定. 中国卫生检验杂志

  余新华 ,浅析影响肌酐测定因素

  鄢斌 ,消除胆红素对肌酐测定的干扰[期刊论文]-实用医技杂志


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