实验分析方法--HPLC分离固定相基质的形态
目前HPLC分析中常用的几种形态的固定相如图1所示，主要包括全多孔微球、薄売型微球、灌流色谱固定相和整体材料，其中由于全多孔微球固定相具有能够很好地兼顾柱效、样品容量、使用寿命等众多理想的性质，应用最为普遍。
图1 HPLC的微粒类型（a）全多孔微球；（b）薄壳型微球；（c）灌流色谱固定相；（d）整体材料
综合考虑柱效、反压和寿命等方面的因素，在分析型HPLC中约5μm粒径的固定相应用最为广泛，1.5~3μm的多孔或无孔微粒在快速分离中显示出较为明显的优势。粒度分布范围越窄，填充色谱柱床的稳定性越好、柱效越高、压力降越小，一般要求粒度分布范围不超过平均值的±50％。对小分子的分离，固定相的孔径在7~12nm、表面积在150~400m2/g的范围比较适合；对分子量大于10000Da甚至更大分子的分离，需要采用孔径大于15nm的微粒，以使溶质能够进入到微孔结构内部的活性表面，达到更好的分离效果。近年来，随着超高压液相色谱仪器的商品化，亚-2μm色谱固定相得到更多的应用。表2中给出了不同性质固定相微粒的应用特性。
表2 不同性质的固定相微粒的应用特性
特性 | 用途 |
5μm全多孔微粒 | 大多数分离 |
3μm全多孔微粒 | 快速分离 |
1.5μm薄壳型微粒 | 极快速分离（尤其是大分子） |
+50%（均值的）粒度分布 | 稳定、重现、高柱效柱、柱压低 |
7~12nm孔径，150~400m2/g（小孔） | 小分子分离 |
15~100nm孔径，10~150m2/g（大孔） | 大分子分离 |
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