引物合成后如何处理?
切割与脱保护基:将合成好的寡核苷酸链从支持物上化学切割下来。常用新鲜的浓氨水来裂解CPG与初始核苷之间的酯键。断裂下来的寡核苷酸带有自由的3'羟基。
纯化:根据所合成寡核苷酸的组成和应用来选定纯化的方法。常用的纯化方法有:C18、OPC、PAGE和HPLC。
定量:根据寡核苷酸在260nm处的紫外吸收来定量。
储存:分装抽干。
需要什么级别的引物
根据实验需要,确定订购引物的纯度级别。
应用 引物长度要求 纯度级别要求
一般PCR扩增 < 60base OPC >60 base PAGE
诊断PCR扩增 < 40base OPC, PAGE
DNA测序 20base左右 OPC
亚克隆,点突变等 根据实验要求定 OPC PAGE,HPLC
基因构建(全基因合成) 根据实验要求定 OPC PAGE
反义核酸 根据实验要求定 OPC PAGE
修饰引物 根据实验要求定 PAGE, HPLC
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