毛细管液相色谱柱的柱上筛板的原位热聚合制备
摘 要: 利用有机聚合物的原位聚合反应, 在0132 mm内径的弹性石英毛细管内制备了3 mm长的柱上筛板,该筛板可以耐受至少40MPa的压力。将5μm C18填料填充到带有筛板的毛细管内, 制备了毛细管液相色谱柱, 色谱分离结果令人满意。用该筛板制备的色谱柱结构最大程度地避免了柱后死体积的产生。
毛细管液相色谱与质谱联用技术已成为蛋白组学研究的重要工具[ 1 - 3 ] 。目前蛋白组学研究中, 主要采用颗粒填充毛细管液相色谱柱。该色谱柱主要由毛细管、固定相床层、筛板、柱尾、引出管(与检测器连接)等部分组成。与常规液相色谱柱不同, 由于毛细管液相色谱柱的柱体积小, 色谱系统内存在的死体积对柱效的影响很大, 因此, 柱尾与引出管连接处的设计非常关键, 如设计不当将导致样品扩散, 柱效降低。采用柱上筛板的结构可以有效地减少柱后死体积。目前报道的有关柱上筛板的制作包括硅胶填料烧结法[ 4 - 5 ] 、硅胶柱上反应法[ 6 ] 、溶胶- 凝胶( Sol - gel)法[ 7 - 8 ] 。
本文介绍了一种新型毛细管液相色谱柱筛板制备方法。利用有机聚合物的原位聚合反应在弹性石英毛细管内制备了耐高压的柱上筛板, 筛板的渗透性、稳定性及耐压性良好。由于筛板制作之前对毛细管内壁进行了预处理, 使筛板与毛细管内壁间通过化学键结合在一起, 因此即使毛细管柱的内径较大也不会在毛细管内壁与筛板间产生缝隙。本文将填料填充到带有筛板的毛细管内, 制备了毛细管液相色谱柱, 并考察了其对标准样品的分离性能。实验证明, 该方法制备的筛板能够有效防止填料漏出,不影响色谱柱的分离性能。此外, 该方法反应条件温和, 制备过程易控制。
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