肿瘤组织源性的原代细胞培养

一、肿瘤细胞培养的概述        

肿瘤细胞的原代培养与正常细胞的原代培养的条件基本相似。一般常用肿瘤原代细胞培养基础培养基、5～10%血清浓度、细胞培养添加剂、抗生素等等即可。或在原代培养时需加入原代细胞培养的特制添加物，或原患者血清（1~2%）以利细胞生长。用细胞生长因子如胰岛素、氢化可的松、雌激素等等。也可以考虑动物媒介培养。

二、肿瘤细胞的十大生物学特征

自给自足生长信号（Self-Sufficiency in Growth Signals）；

抗生长信号的不敏感（Insensitivity to Antigrowth Signals）；

抵抗细胞死亡 (Resisting Cell Death)；

潜力无限的复制能力 (Limitless Replicative Potential)；

持续的血管生成 (Sustained Angiogenesis)；

组织浸润和转移 (Tissue Invasion and Metastasis)；

避免免疫摧毁 (Avoiding Immune Destruction)；

促进肿瘤的炎症（Tumor Promotion Inflammation）；

细胞能量异常（Deregulating Cellular Energetics）；

基因组不稳定和突变（Genome Instability and Mutation）；

三、肿瘤细胞分离和培养的基本方法

根据细胞种类不同选用不同的促细胞生长因子。肿瘤组织分离为肿瘤细胞原代培养的方法主要有组织块法、酶消化法、钽网法、脱落细胞法等。

1、组织块法

将取得的瘤组织去除脂肪、结缔组织及坏死部分，在平皿中用Hanks液洗3次，剪碎组织，切成1~2mm3小块，接种于培养瓶（或皿）中，370C、5%CO2或加盖并塞在普通恒温箱中培养。

2、酶消化法

在剪碎组织，切成1~2mm3小块中，加入0.25%胰蛋白酶或2000U/ml胶原酶，在370C水浴中消化30min或更长一些，去除消化液，用洗液洗3次，培养基洗1次后，用完全培养基悬浮，并用吸管吹打分散制成细胞悬液，计数。以（5~10）x108个/L细胞浓度，在专业性原代肿瘤细胞完全培养体系中，370C、5% CO2下分瓶（或皿）中培养。

3、钽网法

在一张面积约为1cm2的钽网上放入上述剪碎的一块或几块肿瘤组织块（1~2mm3大小），用镊子轻压，使其粘于网上，再把钽网放入培养皿中，使网下的组织块与皿壁紧紧接触， 在专业性原代肿瘤细胞完全培养体系中，于370C、5% CO2下培养，每隔2~3天换液一次，5天后可见细胞从网上移出，并能在相当于肿瘤组织部位形成纯净的单层肿瘤细胞。

4、脱落细胞法

将新鲜的肿瘤组织去除脂肪和结缔组织后，洗液洗2次，用刀片将肿瘤组织切成细薄片，在切割的同时有许多肿瘤细胞脱落下来，脱落细胞经洗涤后，加入完全培养基，便可获得较纯的上层细胞在专业性原代肿瘤细胞完全培养体系中，于培养瓶（或皿）中，370C、5% CO2下培养，每隔2-3天换液一次，7-10天肿瘤细胞逐渐长成单层。

记住：

1、全程操作和周围环节一定要严格无菌，污染可能伴随原代细胞分离、培养、冻存、复苏、运输等的某一环节或整个环节中，污染一定是原代细胞培养失败的头号问题。

2、 一定要用专业性、配套的原代细胞完全培养体系。在原代细胞分离和第一代原代细胞培养用的原代细胞培养体系是该品种原代细胞培养的最好原代细胞培养体系。