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吞噬细胞功能检测

2020.9.14

体内具有吞噬功能的细胞群按其形态的大小分两类:一类为大吞噬细胞,即组织中的巨噬细胞和血液中的大单核细胞。它们对异物有吞噬和消化的功能,在机体非特异性免疫、特异性免疫和免疫调节中有重要的作用,因此,通过测定吞噬细胞的吞噬作用可判断机体的免疫力。另一类为小吞噬细胞,即中性粒细胞。中性粒细胞的功能包括粘附、移动、吞噬杀菌等,是机体天然免疫力的重要组成部分。

(一)中性粒细胞吞噬功能的测定

【材料】

1试剂:白色葡萄球菌,肝素溶液,甲醇,碱性美蓝染液。

2器材:血红蛋白吸管,凹玻片,载玻片,1mL注射器及26号针头,采血针,酒精棉球等。

【方法】

1菌液的制备

将白色葡萄球菌接种于肉汤培养基中,放37℃温箱内培养12h左右;置100℃水浴中加热10min,杀死细菌,用无菌生理盐水稀释成每毫升6×108个细菌备用。

2试验方法

用血红蛋白吸管吸取受试者耳垂或指血40uL,立即加入盛有20uL肝素(浓度为

20U/mL)的洁净凹玻片的凹孔内,轻轻搅动混匀,再加上述葡萄球菌菌液20uL充分混匀。然后置入铺有湿纱布的有盖容器内(此容器先放37℃温箱中预温),在37℃温箱中作用30min,其间每隔10min摇匀一次。作用完毕,取1小滴混合液置于洁净无油污的载玻片一端,推成薄片。待干后,用甲醇固定4~5min,碱性美蓝液染2~3min,置油镜下观察。随机计数100个中性粒细胞,分别记录发生吞噬和未吞噬的白细胞数,对有吞噬作用的白细胞,应同时记录所吞噬的细菌数。

3结果表示方法

(1)吞噬细胞(%):即100个中性粒细胞中吞噬有细菌的细胞数;

(2)吞噬指数:将100个中性粒细胞所吞噬的细菌总数除以100,得到每个白细胞吞噬细菌的平均数,即为吞噬指数。

4临床应用

一般多用于病人治疗前后白细胞吞噬指数与百分率的动态变化,作为观察疗效和判断预后的参考指标。

【注意事项】

本法可清楚地观察到中性粒细胞的清理作用,但作为科研指标,客观性差,不宜采用。

(二)巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

【材料】

1动物:昆明种小白鼠。

2试剂:1%鸡血球,2%面粉或淀粉肉汤,瑞特氏染液。

3器材:无菌注射器及针头,玻片。

【体内方法】

1于实验24小时前,在小鼠腹腔内注射1mL淀粉肉汤。

2次日重复注入淀粉肉汤1mL,经过1小时后再给小鼠腹腔内注入1%鸡血球悬液1mL。

3血球注射后1小时,用注射器抽取小鼠腹腔渗出液做涂片,自然干燥后,进行瑞氏染色(方法同前)。

4用油镜观察巨噬细胞浆内有无被吞噬的鸡红细胞,并进行计数。

5结果:

(1)吞噬百分率:油镜下观察100个巨噬细胞,计算吞噬百分率,以表示吞噬细胞的吞噬功能。正常值为60%左右。

(2)吞噬指数。按下列公式算出吞噬指数(即每个吞噬细胞吞噬鸡红细胞的平均数):吞噬指数=100个巨噬细胞中所吞噬的鸡红细胞总数/100


(3)吞噬鸡红细胞的等级观察:借以判定巨噬细胞吞噬和消化功能,Ⅰ级表示吞噬功能,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ级表示消化功能强弱。

Ⅰ级:被吞噬的鸡红细胞完整,未消化,胞浆浅红或浅黄带绿色,胞浆浅紫红色。

Ⅱ级:轻度消化,胞浆浅黄绿色,核固缩,染成紫蓝色。

Ⅲ级:重度消化,胞浆淡染,胞核呈浅灰黄色。

Ⅳ级:完全消化,巨噬细胞内仅见形态类似鸡红细胞大小的空泡,边缘整齐,胞核隐约可见。

【注意事项】

鸡红细胞呈橄榄球形,有清楚的细胞核,亦呈橄榄球形,染色后清晰可见,容易与小白鼠的红细胞相区别。本实验的观察指标是吞噬百分率、吞噬指数,这两个指标是主观指标,客观性差。


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