高速逆流色谱仪常用溶剂体系选择方法
1. 已知的溶剂体系
被分离物质种类 | 基本两相溶剂体系 | 辅助溶剂 |
非极性或弱性物质 | 正庚（已）烷-甲醇 | 氯烷烃 |
正庚（已）烷-乙腈- | 氯烷烃 | |
正庚（己）烷-甲醇（或乙腈）-水 | ||
中等极性物质 | 氯仿-水 | 甲醇，正丙醇，异丙醇 |
乙酸乙酯-水 | 正己烷，甲醇，正丁醇 | |
极性物质 | 正丁醇-水 | 甲醇，乙酸 |
2. 分配系数测定法
一个稳定的两相溶剂体系是否适合于目标物质的分离，通常要看物质在该溶剂体系中的分配系数是否在一个合适的范围内。分配系数K=CS/CM或CU/CL。其中CS指溶质在固定相中的浓度，CM指在流动相中的浓度，CU指溶质在上相中的浓度，CL指溶质在下相中的浓度。一般而言，对HSCCCzui合适的K值范围是0.5~2。当CS/CM≤0.5时，出峰时间太快，峰之间的分离度较差；当CS/CM≥1时，出峰时间太长且峰形变宽。而当0.5<CS/CM<2时，可以在合适的时间内，得到分离度较好的峰形。
溶质的分配系数可以采用分析型HPLC来确定。如果有目标成分的对照品或标准品，当溶质在两个互混溶的液相中分配之后，各组分的浓度即可用HPLC精确测定出来，从而计算出分配系数K值。如果没有目标成分的标准品，混合物中各组分的分配系数值可以通过下述方法进行简单的计算：即先将一定量的样品溶解在体积为Vu的上层溶液中，然后再用体积为VL的下层进行分配，分别测定分配前和分配后上层溶液中各组分的响应值，然后用图1所示的方法即可计算出分配系数。同样，也可以采用薄层色谱法来测定各组分的分配系数。
3. HPLC扫描法
对于一个未知样品，可以通过HPLC扫描的方法，对样品的复杂程度及其组分的极性程度有一个初步的了解。具体来讲，可以将样品注入一根15cm长的C18HPLC柱，以乙腈和水为流动相，以1ml/min流速，从100%乙腈梯度洗脱1h，观察样品出峰的位置。如果绝大部分峰的保留时间都小于15min，也就意味着这些组分是由含量小于25%的乙腈流动相洗脱出来的，在CCC中可以采用极性溶剂体系，如正丁醇-水等；如果峰的保留时间是在15～50min之间，意味着这些物质具有中等极性，在CCC中可以采用中等极性溶剂；如果绝大部分峰在50min后洗脱出来，也就是由大于80%的乙腈流动相洗脱出来的，那么在CCC分离中应该采用弱极性的容积体系。
4. 薄层色谱法
采用薄层色谱（TLC）法也可选择对HSCCC合适的两相溶剂体系。在硅胶板上作薄层色谱试验，用水饱和的有机层（即两相中的有机相）作展开剂。如果需要分离的组分的Rf＞0.5（低级性溶质），这说明此种条件适用于这些组分混合物的分离，而且弱极性的有机相适用于作流动相。对于极性较大的溶质Rf＜0.5，则极性较强的那一相可作流动相。这种方法只能给出应选溶剂体系的大体指示，因为TLC本身就包含有分配和吸附两种机理，而CCC则是纯粹的液-液分配过程。然而，TLC仍不失为一种简便易行的手段，当小量的样品在溶剂体系的两相之间分配时，TLC仍能用来检查其分布状况。比如，如果发现样品几乎全分布在一相之中，那么这个溶剂体系是绝对不能用的。
5. 生物活性物质分配比率法
这是一种只适合于具有生物活性成分的方法，其原理基于需分离的混合物的生物活性分布规律。首先振摇溶有样品的两相溶剂体系，然后分别测定上层和下层溶液的生物活性。在两相中活性分布比较均衡的溶剂体系即可采用。这一方法的缺点是要获得生物测试的结果往往需要较长的时间。该方法主要用于抗生素的分离。
6. 分析型HSCCC法
用分析型HSCCC法来选择制备型分离时所用的溶剂体系是一种很实用的方法。由于其柱体积小、所需溶剂量少，在很短的时间内即可获得合适溶剂体系的信息。
溶剂体系的选择和优化是一项复杂而艰巨的工作，目前有关溶剂体系的选择方法和评价体系较多，但是系统性和理论性较差，实际操作起来较为困难。因此，在实际工作中，溶剂体系的筛选通常更多的是参考已知的溶剂体系，或者根据经验而进行。
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