非手性杂质的UPC2分析方法开发（一）
应用优势
ACQUITY® SQD质谱仪
关键词
UPC2，药物杂质，稳定性指示方法，降解分析，方法开发，甲氧氯普胺，合相色谱
简介
超高效合相色谱 (UPC2™)以亚2 µm颗粒为固定相，采用超临界流体二氧化碳作为主要流动相成分。合相色谱是一种使用少量溶剂即可实现高速分析的分析工具，尤其是在分析杂质时，相比于反向液相色谱(LC)，合相色谱的正交方法更有利于发现未知杂质。合相色谱的方法开发不同于液相和气相色谱的方法开发策略，后者已经基本成熟。为了简化这个过程，我们需要研究一种系统的方法，用于开发非手性物质的合相色谱方法。
了解药品和药物材料中的杂质分布是一个重要步骤，样品纯度的评估可帮助制药公司在药物开发过程中做出决策，推进药物上市进程。杂质分布将确定供应商所提供原材料的质量、成品的保质期、合成途径和防止伪造的知识产权保护。色谱图的正交对比有助于生产商作出最明智的决策。在本应用纪要中，实验采用ACQUITY UPC2系统分析甲氧氯普胺及其相关杂质。如图1所示，甲氧氯普胺（胃复安）是一种止吐药，可以治疗胃灼热、胃溃疡以及由化疗导致的恶心。方法开发研究了色谱柱和溶剂，以确定优化特异性和峰形的合适方法条件。
图1. 甲氧氯普胺的化学结构。
实验
UPC2条件
系统： 配备PDA和SQD检测器的ACQUITYUPC2系统
色谱柱： ACQUITYUPC2BEH2-EP
3.0×100mm，1.7µm
流动相A： CO2
流动相B：含1g/L甲酸铵的甲醇/乙腈(50:50)溶液，加2%的甲酸
清洗溶剂： 70:30的甲醇/异丙醇
分离模式：梯度；溶剂B在5.0min
内由2%增加至30%；
达到30%后，保持1min
流速： 2.0mL/min
CCM反压： 1500psi
柱温： 50℃
样品温度： 10℃
进样体积： 1.0µL
运行时间： 6.0min
检测条件： PDA3D通道：PDA，200到410nm；20Hz
PDA2D通道：270nm，4.8nm分辨率（补偿500到600nm）
SQDMS：150到1200Da；ESi+和ESi-
补液流速： 不需要
数据管理：Empower3软件
样品描述
分离度溶液由甲氧氯普胺和八种相关杂质制备而成，将其置于TruView™最大回收样品瓶中等待进样，如表1所示。杂质的浓度为甲氧氯普胺标准品浓度的0.1% w/w。分离度溶液用于色谱分析方法开发。
峰编号 | 名称 | 分子量 | EP参考 |
甲氧氯普胺(4-氨基-5-氯-N-(2-(二乙氨基)乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺 | 299.8 | ||
1 | 4-氨基-5-氯-2-甲氧基苯甲酸 | 201.6 | (EP C) |
2 | 4-(乙酰氨基)-2-羟基苯甲酸 | 195.2 | (EP H) |
3 | 4-氨基-5-氯-N-2-（二乙氨乙基）-2-甲氧基苯甲酰胺 N-氧化物 | 315.8 | (EP G) |
4 | 4-氨基-5-氯-N-2-（二乙氨乙基）-2-羟基苯甲酰胺 | 285.8 | (EP F) |
5 | 4-(乙酰氨基)-5-氯-N-2-(二乙氨乙基)-2-甲氧基苯甲酰胺 | 341.8 | (EP A) |
6 | 4-(乙酰氨基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯 | 223.2 | (EP D) |
8 | 4-(乙酰氨基)-5-氯-2-甲氧基苯甲酸甲酯 | 257.7 | (EP B) |
9 | 4-氨基-2-甲氧基苯甲酸甲酯 | 181.1 |
表1. 甲氧氯普胺杂质标准品、峰的名称、质量数和欧洲药典分类列表。
正交法进行药物杂质分析
用于药物杂质分析的 UPC2 方法
对杂质采用超临界流体色谱分析符合 ICH 指南和法规要求
沃特世解决方案
ACQUITY UPC2™系统
ACQUITY UPC2色谱柱套装
Empower® 3软件
