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基因导入的化学方法

2021.6.09

  即用化学方法构建非病毒载体系统,借之完成基因转导。主要包括以下两种。

  1脂质体载体

  脂质体载体方法具有安全、简单、低毒、无免疫原性等优点,适用于注射方法进行器官靶向性转移并有一定的转移效率。是除病毒载体转移方法之外的另一种有价值的体内基因转移方法。多用于体外转化细胞,或通过瘤组织内注射进行体内转化,并已有少数临床应用的报告。常用的是阳离子脂质体(商品名为Lipofectin)。它可自发的与DNA形成复合物,保护外源DNA不被核酸酶降解,具有制备简单、安全无毒、无免疫原性、重复性、对基因片段大小无限制且转染操作方便等优点。由于它可与细胞膜直接融合而能有效地避免溶酶体破坏,故远比传统的脂质体效率高。缺点是靶向性有限。Nishikawa等从BALB/c小鼠的尾静脉注射以荧光素酶基因为报告基因的质粒DNA-脂质体复合物, 发现肺、肝、脾等器官组织中都有荧光素酶基因及其产物,持续表达超过3个月。常规脂质体易被网状内皮系统(RES)细胞摄取,在巨噬细胞本身可成为靶细胞的部位,RES的这种亲合性是有利的。Hasegawa等采用日本血凝病毒( hemagglutinating virus of Japan,HVJ)脂质体为载体,用HSV-tk/Gcv系统治疗肝癌发现,在体外试验中当Gcv的浓度100microg/ml时几乎所有肿瘤均被杀死,甚至当转导率只有20%时,也有1/3肿瘤被消灭。此方法重复应用效果更佳,且皮下注射未见明显的炎症反应。

  2受体介导法

  利用肝细胞上富含转移因子和糖蛋白受体的特点,人工合成多聚阳离子氨基酸,进而连接转移因子(或糖蛋白)和目的基因构成复合物,通过与肝细胞表面的受体结合来实现目的基因的转移。此法靶向性好,但受体介导的内吞小泡会被转运到溶酶体,易被溶酶体降解而造成目的基因表达时间短暂,表达效率低下。利用氯哇抑制溶酶体酶或腺病毒与内吞小泡相融合而将其破坏释放出外源DNA,可提高转化效率。

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