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蛋白纯化注意事项

2021.8.29

1.  选择表达载体时,要根据所表达蛋白的最终应用考虑。如为方便纯化,可选择融合表达;如为获得天然蛋白,可选择非融合表达。

 

2.  融合表达时在选择外源DNA同载体分子连接反应时,对转录和转译过程中密码结构的阅读不能发生干扰。

3.  菌液OD值要小于1,否则细胞太浓太老,不易破碎,且质粒易丢失。

4.  诱导时间最好做一个梯度,不同蛋白诱导时间需摸索。

5.  诱导温度适当摸索:25、30℃。

6.  IPTG浓度:一般在1 mM 以内,可适当摸索。

7.  超声条件可视实际情况改变,只要使菌体裂解充分即可,即菌液清亮不粘稠。




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