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影响荧光测量的几种因素

2018.3.02

1.温度影响:一般说来,荧光随温度升高而强度减弱,温度升高1℃,荧光强度下降1~10%不等。测定时,温度必须保持恒定。 
2.PH值影响:PH 值影响物质的荧光,应选择最佳PH制备样品。   
3.光分解对荧光测定的影响: 
荧光物质吸收紫外可见光后,发生光化学反应,导致荧光强度下降。因此,荧光分析仪要采用高灵敏度的检测器,而不是用增强光源来提高灵敏度。测定时,用较窄的激发光部分的狭缝,以减弱激发光。同时,用较宽的发射狭缝引导荧光。荧光分析应尽量在暗环境中进行。   
4.散射光的影响: 
主要是瑞利散射光和拉曼散射光的影响较大。校正办法:先用短的激发光激发,检出溶液的拉曼峰,然后进行荧光光谱校正。因为荧光光谱不随激发光波长的改变而改变,而拉曼光却随之改变。   
5.高浓度样品的影响: 
1)当激发光照射高浓度样品时,在激发光入口附近产生荧光,但这些荧光并不能进入荧光检测器。 
2)高浓度的分子之间相互作用而发生活性阻碍现象。

3)荧光的再吸收:即荧光光谱的短波长端和激发光谱的长波长端如果相互重叠,则发生荧光再吸收。          

总之,高浓度样品进行荧光分析时,应进行稀释。

   

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