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详述Wescor露点渗透压仪5600/5520的广泛应用(四)

2020.6.08

哺乳动物组织 

渗透压: 提高组织培养的关键

为了能让组织细胞保持他们的最初的形态和功能,我们需要提供组织自然的生长条件。其中培养基的渗透压是主要考虑的因素。

例如在人体中,组织中的细胞被胞液及其他细胞包围。当将细胞从组织培养中取出放到塑料或者玻璃表面时,仍需要有液体包围。放到外源环境时,如果渗透压不同,会引起渗透压休克。

渗透压休克能够引起细胞体积改变。研究表明即使微小的短期细胞体积变化都会影响细胞新陈代谢和基因表达。因此必须重视渗透压对细胞的影响。

渗透压的测量可以提高组织培养率

经验表明有意识测量培养基的渗透压可以有效提高细胞产量。因为每次购买的培养基成份变化很大,因此都必须在使用前进行检测。

由于细胞分离的密度成份总是维持在等压范围内,因此测量培养基的渗透压可以显著提高组织培养。而且维持正常的渗透压可以保持酶的活性和阻止膜的扭曲。但是如何测渗透压能提高细胞培养成功率呢?

控制渗透压

1970年怀俄明研究表明:哺乳动物血液渗透压和哺乳动物细胞培养基渗透压是非常重要的。该实验是经过很多实验结果证明统计来的。

利用渗透压研究肾和骨髓组织

例如肾脏中的细胞经常会被暴露于NACL和尿素环境中,因此必须能够适应超高渗透压环境。 有一些人员

Maurice B. Burg, Natalia I. Dmitrieva, et al,做了很多实验来验证渗透压是否影响细胞并且细胞会产生什么样的机制来抵抗变化。

Burg等人的研究结果表明无论在细胞内外都经受各种水平的渗透压变化,通过几种保护机制来适应高渗透压。

对测渗透压的反应

因为实验表明环境压力或许调解t-PA基因表达,E.G. Levin, L. Santell等人做了是否渗透压的改变也会影响该基因的实验。即使从超高渗透压环境到等压环境,Hela细胞培养表明会增加T-Pa基因表达。

带有T-Pa基因的重组CHO细胞在无血清培养条件下的实验被进行了研究。通过改变渗透压可以证明细胞表达收到影响。

而且渗透压的改变也可以改变RNA的表达水平,许多人做了实验进行了研究。

W. M. Miller, V.M. deZengotita等人研究发现在不同的培养基中,CO2和渗透压可以互相影响杂交细胞的生长。但如果两者联合起来使用,细胞生长会在很大范围内被抑止。

K.C. Katsirdakis调解渗透压范围在729 和930 mOsmol/kg,当在25-degree C无光时,pH 值在5.2-7.2, 可以导致葡萄叶的生长。

超高渗透压引起的变化

J.E. Olsen 和G.Z. Li 发现当在培养的星细胞中由于钠和钾离子导致高渗透压,细胞膜会保持不变。他们同样发现钠离子通道在很低的渗透压就会被激活,同时会释放出大量的钠,钾等离子。

G.B. Tennant’s的研究表明克隆骨髓细胞的生长在低渗透压会生长的很快,这表明低渗透压细胞存在巨大的敏感性,对克隆细胞株生长有力。

渗透压条件改变引起的反应

K.B. Marcum 和 C.L. Murdoch 研究了海岸植物的耐盐性,通过用中度的盐浓度刺激根生长,通过不断调整盐浓度的渗透压直到450 mM NaCl.他们认为原生质在最高的盐浓度会改变渗透压。

组织细胞嫁接

渗透压仪可以提供别的方式无法提供的信息例如一些有用的实验室参数。渗透压仪在医院诊断病人中非常关键,可以减少治疗花费。

渗透压仪对冷冻点样品测量是很有用的,别的方法对挥发性物质不敏感,可能在诊断糖尿病患者时有误导。

制造业

美国的USP公司要求测量注射用药的渗透压值,但是常规方法又得不到该值。

B.S.R. Murty,等人试图解决该问题,但最初其建立的方法只能用于含两种成份的溶液,后来使用了渗透压仪可以方便计算出该值。

USP公司尽量想通过渗透压仪解决其溶液的渗透压!渗透压仪在测量含盐溶液的等渗点时比较准确,但是推广到所有的溶液都适用该等渗仪则是错误的。

制药业:医院混合物,药品制造商和营养学家都会经常使用渗透压仪。该优点可以包含检测一致性,最小化外伤和最优化反应动力学。


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