细胞研究用的显微镜分类和工作原理（二）

细胞中有些物质，如叶绿素等，受紫外线照射后可发荧光；另有一些物质本身虽不能发荧光，但如果用荧光染料或荧光抗体染色后，经紫外线照射亦可发荧光，荧光显微镜（图2-2，3，4）就是对这类物质进行定性和定量研究的工具之一。

图2-3 落射式照明原理

荧光显微镜和普通显微镜有以下的区别：

1、照明方式通常为落射式，即光源通过物镜投射于样品上（图2-3）；
　　2、光源为紫外光，波长较短，分辨力高于普通显微镜；
　　3、有两个特殊的滤光片，光源前的用以滤除可见光，目镜和物镜之间的用于滤除紫外线，用以保护人目。

图2-4 荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色）

（三）、激光共聚焦扫描显微镜

图2-5 激光共聚焦扫描显微镜

图2-6 LCSM照片，蓝色为细胞核，绿色为微管

激光共聚焦扫描显微镜（laser confocal scanning microscope，图2-5、6）用激光作扫描光源，逐点、逐行、逐面快速扫描成像，扫描的激光与荧光收集共用一个物镜，物镜的焦点即扫描激光的聚焦点，也是瞬时成像的物点。由于激光束的波长较短，光束很细，所以共焦激光扫描显微镜有较高的分辨力，大约是普通光学显微镜的3倍。系统经一次调焦，扫描限制在样品的一个平面内。调焦深度不一样时，就可以获得样品不同深度层次的图像，这些图像信息都储于计算机内，通过计算机分析和模拟，就能显示细胞样品的立体结构。
激光共聚焦扫描显微镜既可以用于观察细胞形态，也可以用于细胞内生化成分的定量分析、光密度统计以及细胞形态的测量。