实验室分析方法--凝胶渗透色谱净化的原理及要求

凝胶渗透色谱（GPC）与凝胶过滤都统一在排阻色谱的名下，不过习惯上使用亲水性的凝胶，如葡聚糖凝胶，并使用水溶液作为洗脱液称为凝胶过滤法；用疏水性凝胶如交联的聚苯乙烯凝胶，并使用有机溶剂作为洗脱剂则称为凝胶渗透色谱法。

它们都有相同的工作原理，即在凝胶柱中装有化学惰性的多孔物质——凝胶作为固定相，然后以溶质的分子尺寸大小进行分离。当选择的凝胶孔径与被分离的溶质分子的尺寸相匹配后，

被分析体系中的较大尺寸的分子只能进入凝胶的大孔，而较小尺寸的溶质除了可以进入凝胶的小孔外，还可以进人比它尺寸大的中孔、大孔。如此意味着尺寸小的溶质分子要比尺寸大的分子经历更长的路径，结果是大分子首先被淋洗出来，而小分子后淋洗出，这样，一个被分析的体系中溶质分子是以其分子的尺寸大小进行分离的。

作为净化的要求，它比色谱过程简单，如同用膜渗析的方法（分离效果不如GPC那样精细）。GPC法能除去被分析样品中那些有干扰的大分子，反过来也可以除去小分子以获得净化的大分子。使用凝胶过滤的方法，用SephadexG25和Bio — GelP2净化经糖蛋白酶酶解获得的糖肽（分子质量在1000〜3000u，这包括去除未酶解的糖蛋白大分子和小分子盐对分析的干扰）。凝胶渗透净化可以与GC （包括GC/MS）、LC （包括LC/MS）相配合，可以省时、省力达到去除干扰物质的目的，不必为去除干扰而花费很多时间，由此增加了 GC、LC的运行时间，与此同时也提高了 GC、LC色谱柱的寿命。

所以，GPC方法尤其适合于像食品、农作物、体液、泥土等这类复杂体系中目标物的净化，例如动物脂肪、肉类中氯代烃农药残留物，粮食、饲料中的黄曲霉素，水果、蔬菜或其他作物中的有机磷农药残留物等。

GPC的净化主要依赖于一根GPC柱，它可以手工操作来达到净化的要求。不过，为了进行大量样品的预处理，目前发展f专用的全自动化的GPC处理系统，如O —I— Analytical公司开发的GPC Autoprep 2000装置可以在易产生干扰的共提物体系中对环境与食品的60种目标化合物进行自动分离和收集。

实际上，最新的装S既可以与全自动索氏提取器相配合，也可以（或者说更适合）与自动样品蒸发浓缩器联用供GC/MS、HPLC/MS分析，由此构成了完整的样品预处理系统。例如，LCTech公司开发的GPC Ultra和J—2公司开发的Accuvap MP5均属于全自动样品定量制备仪，可以方便地实现样品的净化和定量浓缩。