Bradford法测蛋白浓度

2019年4月21日 16:10:48 来源: 生物在线
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原理:这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下,可配成淡红色的溶液,当与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。
溶液:
①Bradford储存液
100ml95%乙醇
200ml88%磷酸
350mgServaG蓝
室温下长期保持稳定。
②Bradford工作液
425ml双蒸水
15ml95%乙醇
30ml88%磷酸
30ml Bradford储存液
用滤纸过滤,保存于室温棕色瓶中,可保存数周,但在使用前需要过滤。
③配制1mg/ml牛血清蛋白(BSA)
做标准曲线:

表4.2 蛋白质浓度测定标准曲线制作表
样品号
蛋白量
(ug) 标准溶液
1mg/mlBSA(ul) 实验缓冲液
(ul) Bradford
试剂(ml) A595
1 0 0 100 3 0
2 2.5 2.5 97.5 3 0.120
3 2.5 2.5 97.5 3 0.130
4 5 5 95 3 0.250
5 5 5 95 3 0.215
6 7.5 7.5 92.5 3 0.331
7 7.5 7.5 92.5 3 0.364
8 10 10 90 3 0.460
9 10 10 90 3 0.442
10 12.5 12.5 87.5 3 0.531
11 12.5 12.5 87.5 3 0.562
12 15 15 85 3 0.633
13 15 15 85 3 0.617
14 17.5 17.5 82.5 3 0.684
15 17.5 17.5 82.5 3 0.650
16 20 20 80 3 0.721
17 20 20 80 3 0.727


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