分析测试百科网 > 行业资讯 > 技术原理

牛奶中抗生素的快速检测

2020.3.04

本文主要对大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联胶体金快速检测试纸条的检测限、特异性、重复性、假阳性率、假阴性率以及影响胶体金检测效果的主要因素等方面进行了评价。

大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联胶体金快速检测试纸条，是以胶体金技术和免疫层析技术相结合，可一次检测4 种抗生素的快速检测产品。广泛地应用于牛奶中抗生素的筛查，不需要仪器和设备，在10min 内就能检测出结果。本文主要研究使用快速试纸条对牛奶中的抗生素进行快速检测。

实验部分

实验材料

大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素四联胶体金快速检测试纸条(勤邦生物技术公司)：牛奶购自超市;大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素及其他抗生素标准品(sigma)。

检测方法与结果判断

吸取200 μl 待检牛奶样品于冻存有胶体金标记抗体的微孔中，缓慢抽吸至与微孔中试剂充分混匀。将试纸条插入印有“MAX”线端朝下，使之完全浸入溶液中。20~25℃孵育5 min 后，取出试纸条观察颜色，判定结果。

阴性(-)：C 线显色，T 线均显色，无论颜色深浅，均表示牛奶样本中大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素浓度均低于检测限。阳性(+)：C 线显色时，T1 线不显色，表示大观霉素浓度大于等于检测限;T2 线不显色，表示链霉素浓庆大霉素浓度大于等于检测限;T4 线不显色，表示新霉素浓度等于或高于检测限;未出现C 线，表明试纸条已失效。

图1. 试纸条结果判定。

最低检测限试验

将不同浓度的大观霉素、庆大霉素、新霉素、链霉素标准品添加的牛奶样品分为5 组，每组样品10 份，大观霉素、庆大霉素浓度分别为5、10、15、20、25 μg/L ;新霉素各组浓度分别为200、300、400、500、600 μg/L ;链霉素各组浓度分别为20、40、60、80、100 μg/L，分别用试纸条检测，5 min 后观察结果。

特异性试验

将牛奶中常见的其他抗生素(青霉素G、头孢洛宁、四环素等)添加到阴性牛奶样品中，使其终浓度为500 μg/L，用试纸条重复检测5 次，5 min 后观察结果。

重复性试验

分别取添加大观霉素、庆大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L 标准品的阳性牛奶和阴性牛奶各1 份，分别用试纸条进行重复检测20次，5 min 后观察结果。

不同温、湿度检测

分别取添加大观霉素、庆大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L 标准品的阳性牛奶和阴牛奶各5份，分别在室温(25℃)、培养箱(37℃)和冰箱(4℃)，在气候箱中相对湿度为30~40%， 60~70%，85~90% 时用试纸条进行检测， 5 min 后观察结果。

假阳性、阴性率

随机取阴性牛奶样品50 份，用试纸条检测，5 min 后观察结果，以考察试纸条的假阳性率;随机取添加大观霉素、庆大霉素各20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L 标准品的阳性牛奶样品50 份，用试纸条检测，5 min后观察结果，以考查试纸条的假阴性率。

检测结果与分析

试纸条最低检测限

牛奶中大观霉素含量、庆大霉素含量<15 μg/L 时，均出现阴性结果，大于等于20 μg/L 时，均出现阳性结果，15 μg/L 时，检测10 份样品中有1 份出现阳性结果，抑制率为10% ;新霉素含量≤ 400 μg/L 时，均出现阴性结果，大于等于500 μg/L 时，均出现阳性结果;链霉素含量≤ 60 μg/L 时，均出现阴性结果≥ 80 μg/L 时，均出现阳性结果。在本试验条件下试纸条的最低检测限规定为：大观霉素20 μg/L、庆大霉素20 μg/L、新霉素500 μg/L、链霉素80 μg/L。

表1. 不同浓度抗生素牛奶检测结果