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血液细胞,流式细胞分析及免疫组化试剂的研制

2021.6.29

血液细胞分析试剂研发


血液常规想必是大家很熟悉的临床检测项目了,传统的检查方法是人工借助显微镜,对血液中的红细胞,白细胞,血小板进行计数和白细胞分类,费时费力。随着血液细胞分析技术的发展,自动化设备也应运而生,操作简单,准确性高,可以快速出具检测报告。

那么血液细胞分析相匹配的试剂主要包括稀释液,溶血剂,染色液及清洁液等。下表列了各成分的用途:


血液细胞技术采用的是电阻抗原理,即库尔特原理,当一个不良导体颗粒,通过两个电极之间时,导至电路的电阻抗发生变化。血液细胞为不良导体,当一个细胞通过计数小孔时,会导至小孔两端电阻的变化,将其转化为脉冲,感应器通过检测脉冲的数量及大小,从而计算出通过小孔的细胞数量及体积。脉冲的数量代表细胞的数量,脉冲的大小代表细胞的体积大小,还可以通过特定的直方图,显示出特定细胞群的平均细胞体积,细胞分布情况和是否存在明显的异常细胞群。

血红蛋白的检测通过溶血剂快速破坏红细胞,同时将一定比例的血红蛋白转换为稳定的血红蛋白衍生物,其吸光度与样品的血红蛋白浓度成正比,通过测定吸光值,根据郎伯-比尔定律即可得出血红蛋白浓度。

血液细胞联合检测技术是以流式细胞技术为基础,将流式,射频,鞘流,激光,电导,电阻抗,细胞化学染色等多项技术联合对白细胞分类测定。这里面涉及到鞘流技术,待测血液样本在气体的压力下进入流动室。流动室内充满鞘液,鞘液用以裹携细胞,经由流动室喷嘴流出时形成单一的细胞液柱,液柱与入射激光束在测量区垂直相交,这就是所谓的鞘流技术。


流式细胞分析试剂研制

流式细胞分析技术基于流式细胞仪FCM进行的,是一种用于检测液体中悬浮颗粒特定理化特性如大小,结构,核酸蛋白等分子种类及含量的仪器,集合了单克隆抗体,荧光化学,激光,光电检测,嵌入式系统,计算机技术,流体力学等多个领域技术。在实际操作中,待测样本经过处理后,其颗粒上携带有多种特异性结合的荧光染料。检测时,样本中的颗粒会在仪器液流系统的作用下直线排列于流道的中心,并逐个高速通过仪器的检测区域。流式细胞仪按照功能分为分析型和分选型。


免疫组化试剂研制

免疫组织化学(IHC)技术,是免疫学和组织化学相结合的一项技术,根据抗原抗体结合反应的原理,利用抗体特异性识别组织或细胞中的目标抗原,再应用酶标二抗或荧光二抗靶向结合抗体,使组织或细胞中的目标抗原得以显现,然后借助光学显微镜观察,结合照相系统成像,实现对目标抗原定性、定位和定量的检测技术。


免疫组化是一种原位检测方法,主要应用于冷冻组织和福尔马林固定-石蜡包埋组织。免疫组化技术步骤繁多,包括标本前期处理,烤片,脱蜡,抗原修复,抗体孵育,检测放大系统孵育,显色试剂染色,复染等。特异性抗体(一抗)是免疫组化技术的核心试剂,抗体质量在免疫组化染色中起至关重要的作用。检测放大系统和显色试剂是免疫组化技术的重要试剂,修复液,缓冲液,封闭剂,抗体稀释液,复染液和封片剂等则是免疫组化技术必不可少的辅助试剂。


此外在分子诊断中也介绍过荧光原位杂交(FISH)技术,IHC和FISH是临床病理诊断过程中的两种重要辅助手段。这两种分别是蛋白和核酸水平的检测方法,各有优势和互补,已经广泛用于日常病理诊断过程中,极大地提高了病理诊断的准确性和可靠性,可以指导临床治疗,同时IHC和FISH也是相关生物医学科学研究的常用技术。随着新蛋白和核酸分子标记技术的不断发现,未来免疫组化和FISH检测技术在临床病理诊断和医学科学研究中的应用范围将更大。


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