实验室分析仪器--色谱柱保留值与分离度重现性变化分析
在实际分离过程中,除了色谱柱不重复带来的问题外,流动相、流速、进样量、温度等因素均会引起分离性能的差异。表3中列出了保留值与重复性变化的主要原因。
表3 保留值与重复性变化的主要因素分析
问题 | 原因 | 主要变化 |
柱间差异 | 基质、键合相差异 | k',α |
使用期间柱变化 | 柱床扰乱 | N |
键合相流失 | k',α | |
硅胶基质溶解 | N | |
强保留化合物吸附 | K',N | |
柱外效应 | 进样量大;进样阀—色谱—检测器之间、检测池、接头体积大 | N |
分离控制不好 | 流动相组分改变 | k',α |
流速变化 | N① | |
温度变化 | K',α,N① | |
柱平衡慢 | 再平衡时间不足 | k',α |
柱超载 | 样品质量太大 | k',N |
①N值的变化通常很小
缓冲液选择不正确,如缓冲盐浓度太低、超出有效的缓冲pH范围,都可能导致保留值重现性不好与峰拖尾的现象。溶剂在放置和脱气过程中都可能导致部分溶剂蒸发损失,使流动相组成发生变化,保留值重现性变差。由于仪器故障导致的流速变化会使所有谱峰的保留值发生改变,检测器基线漂移,噪声提高,同时色谱柱反压波动增大,对色谱柱性能与寿命均有害。
进样量过大能引起柱超载,峰的保留时间和(/或)柱效降低。柱温变化是保留值变化的常见原因,用离子对HPLC与RPC分离离子或可电离的化合物时,情况尤其明显。
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