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定量PCR仪选择宝典3

2019.11.03

此外动态检测范围达10个数量级,而无须将样品稀释;具有熔点曲线分析功能可以鉴别基因型、检测点突变、检测非特异性扩增,具多种检测模式如Taqman探针、荧光染料SYBR Green I检测、序列特异杂交探针等;探针及引物设计方便,杂交探针及引物设计的限制少,而且亦可方便地选用合适大小的扩增子(100~1000bp)。但是Lightcycler需要使用特定的毛细管作为样品管,这在某种程度上提高了消耗成本,也不方便作为常规PCR仪使用。

Corbett的Rotor-Gene也是离心式的定量PCR仪。在品牌的角度上Corbett当然不如Roche罗氏在国内那样家喻户晓,之所以特别提到这个产品,确实是因为Corbett的设计有独到之处。比如Corbett的Rotot-Gene3000标准型是真正独立的4通道可建立新通道,4个独立LED激发光源470nm/530nm/585nm/625nm保证最少的光谱交叉<1 %。PMT检测,6个检测滤光片,可检测荧光包括FAM/SYBR Green I, TET,VIC/JOE,HEX,Max, NED/ TAMRA/ Cy3,ROX/Texas Red和Cy5,Cy5.5等等,机器的适用性非常宽,开放的试剂系统使得机器可适用Taqman探针、荧光染料SYBR Green I检测、分子信标、FRET探针、Amplifluor探针等等,不像某些牌子的定量PCR仪只能适用Taqman法和荧光染料检测。Rotot-Gene3000灵敏度高,宽达12个数量级的线性范围,可正确区分1、2、3拷贝的基因,重复性极佳R>0.99935。由于转子在反应过程之中一直以恒定的低速旋转,使得样品间的温度均一性极佳±0.01℃/秒,同一热反应室提供完全相同的反应条件,同一光学通路提供完全相同的测量通道,每标本每循环检测32次,满足高精度和一致性要求。Rotot-Gene3000提供了36 x0.2ml和72x0.1ml两种转子,检测是通过薄壁管侧壁而非管底进行的,因而可以使用普通的0.2ml PCR管,并允许在试管盖上标记,这降低了使用成本。Rotot-Gene3000的温控速度不如LightCycler,但优于多数的固定加热模块的机型,能达到5℃/秒管内实际升温速度达到2.5℃/秒。Corbett还有一个光学变性专利——让待扩增样品预先进行一次熔解曲线程序,检测荧光染料信号大小的变化,找到代表全部双链DNA解链的峰值对应温度,在其后的反应中就无需总是将变性温度设为94度,也不需要延长孵育时间。这个专利使得反应过程大大缩短。Rotot-Gene主要的问题也是可容纳的样品数量少,只能靠反应速度快,同样的时间可以多运行几轮反应来弥补。对于大量样品的实验室,Corbett同时还提供定量PCR反应自动加样系统,不单可以和自家的Rotor-Gene配套使用提高工作效率和均一性、安全性,也可以配套Roche和ABI的定量PCR仪。这样就不用担心加样累坏了。

3、第三类的荧光定量pcr仪

以cepher公司的Smart CyclerII代表,对于国内的用户来说比较新鲜,但这个一直受美国国防部和安全局、美国军队传染病医学研究中心、美国军队士兵和生物化学合作所资助的公司却相当有来头。Smart CyclerII获得过1998年美国研发R&D100金奖。Smart CyclerII的机型小巧,只有16个样品槽,它的独到之处在于这16个样品槽分别拥有独立的智能升降温模块,也就是说这16个样品槽相当于16台独立的定量PCR仪!独立控温的好处首先是,你可以在同一定量PCR仪上分别进行不同条件的定量PCR反应,更为灵活自定义的梯度优化反应也好,或者是完全不同的几组反应——甚至,你可能只进行个别样品的检测,只占用其中几个样品槽——过一会儿其它的同事也要用——他不需要等待你的反应结束,而可以随时利用空置的样品槽开始其它定量反应!对于各有各忙的多成员的实验室,要是个别样品就占据96孔样品槽,其它人每轮要再等2个多小时,有时还要等几轮,那可够郁闷的。Smart CyclerII的使用频率可以被最大化,大家都不用等待!这个世界上唯一允许不同条件PCR同时进行的定量PCR仪拥有独一无二的优点,是其它任何平板式或者离心式定量PCR都不具备的。

此外,每个温控模块只控制一个样品槽,升降温速度当然更快——高达10℃/秒,控温精度自然就更高——这里根本不用考虑不同样品槽之间的温度均一性的问题,只有每个模块控温精确度的问题。对于普通的96孔板固定加热模块,本身有控温精度和准确度的差异,再加上样品槽不同位置之间的温度差异,而Smart CyclerII就完全减少了一个误差因素。优异的特性使得只要20分钟就可以完成常规的定量PCR反应,大大提高研究人员的工作效率。每个模块独立控制的激发光源和检测器直接与反应管壁接触,保证荧光激发和检测不受外界干扰,固定的结构使得仪器运行更稳定,使用寿命更长。整合有4通道光学检测系统,分别可以检测FAM/SYBR Green I,Tet/ Cy3,Texas Red和Cy5,可在同一样本中进行多靶点分析,同时检测4种荧光信号,可使用多种检测方法,包括Taqman探针、分子信标、Amplifluor引物和Scorpion引物和荧光内插染料等等。宽达9个数量级的线性范围。


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