琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体分类
琼脂糖凝胶电泳色谱仪的载体按熔点可分为高熔点(标准)琼脂糖凝胶和低熔点琼脂糖凝胶。
一、高熔点(标准)琼脂糖凝胶:
制造高熔点琼脂糖凝胶的原料是Gelidium和Gracilaria海藻。这两种琼脂糖的熔点不同,但在实际应用中每种来源的琼脂糖都可以用于分离1~25kb的DNA段。新型的标准琼脂糖具有高凝胶强度和低电内渗,可以制成浓度低至0.3%的凝胶,能方便地分离高分子质量DNA(直至60kb),在任何浓度下DNA迁移速度均比通用的标准琼脂糖快10%~20%。
二、低熔点琼脂糖凝胶:
低熔点琼脂糖凝胶是通过羟乙基化修饰的琼脂糖,可在较低的温度熔化,羟乙基化替代程度决定准确的熔化温度。低熔点琼脂糖主要用于DNA的快速回收,因为大多数该类型琼脂糖在65℃熔化,这个温度远低于双链DNA的解链温度。这种特性使它还可以用于DNA的简单纯化和酶处理,在熔化的凝胶中用核酸直接进行细菌转化。低熔点琼脂糖比等浓度的标准琼脂糖的筛分能力更高,分辨率接近聚丙烯酰胺凝胶,可用于PCR产物、小片段DNA和小RNA(<lkb)的分离。现在低熔点琼脂糖能分辨少至4bp的DNA和分离200~800bp范围内相差2%的DNA段。
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