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电泳带型分析

2020.7.27

DNA电泳需要进行带型分析,在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此,我们对DNA带型做了相应的分析。


带型

原因分析

解决办法

弱带或无带

上样的DNA量不够

增加DNA的上样量,聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高

DNA降解

避免DNA的核酸酶污染


电泳时间过长,DNA跑出

减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度


EB染色的DNA,紫外光源不合适

应用短波长(254nm),增强紫外灯灵敏度


DNA带缺失

小DNA带走出凝胶

减短电泳时间,降低电压,增强凝胶浓度

分子大小相近的DNA带不易分辨

增加电泳时间,核准正确的凝胶浓度


DNA 变性

电泳前请勿高温加热DNA链,以20mM NaCl Buffer稀释DNA


巨大DNA链,凝胶电泳不合适

在脉冲凝胶电泳上分析


DNA带模糊

DNA降解

避免核酸酶污染

DNA上样量过多

减少凝胶中DNA上样量


所用电泳条件不合适

电泳时电压不应超过20V/cm,温度<30℃,巨大DNA链,温度应<15℃,核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力


DNA样含盐过高

电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐


有蛋白污染

电泳前酚抽提去除蛋白


DNA变性

电泳前勿加热,用20mM NaCl缓冲液稀释DNA


不规则DNA带迁移

对于λ/Hind III片段COS位点复性

电泳前加热DNA 65℃加热5-10分钟,然后在冰上冷却5分钟

电泳条件不合适

电泳电压不超过20V/cm,温度<30℃,电泳缓冲液有足够的缓冲能力


DNA变性

以20mM NaCl Buffer稀释DNA,电泳前勿加热



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